配制培养基的步骤?

作者&投稿:窦青 (若有异议请与网页底部的电邮联系)

1、配制溶液

向容器内加入所需水量的一部分,按照培养基的配方,称取各种原料,依次加入使其溶解,最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质,需加热溶解,加热过程所蒸发的水分,应在全部原料溶解后加水补足。

配制固体培养基时,先将上述已配好的液体培养基煮沸,再将称好的琼脂加入,继续加热至完全融化。并不断搅拌,以免琼脂糊底烧焦。

2、调节pH值 

用pH试纸(或pH电位计、氢离子浓度比色计)测试培养基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH进行调节,直到调节到配方要求的pH值为止。

3、过滤

用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时,最好折叠成六层,用滤纸过滤时,可将滤纸折叠成瓦棱形,铺在漏斗上过滤。

4、分装

已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基,须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基,则须将培养基分装于锥形瓶内。

分装时,一手捏松弹簧夹,使培养基流出,另一只手握住几支试管或锥形瓶,依次接取培养基。分装时,注意不要使培养基粘附管口或瓶口,以免浸湿棉塞引起杂菌污染。

装入试管的培养基量,视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时,每只15×150毫米的试管,约装3~4毫升(1/4~1/3试管高度),如制作深层培养基,每只20×220毫米的试管约装12~15毫升。每只锥形瓶装入的培养基,一般以其容积的一半为宜。

5、加棉塞 

分装完毕后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气,避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作,不要用脱脂棉,以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。

制作棉塞时,要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度,揪取手掌心大小一块,铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中,用右手食指插入棉花中部,同时左手食指与姆指稍稍紧握,就会形成1个长棒形的棉塞。

棉塞作成后,应迅速塞入管口或瓶口中,棉塞应紧贴内壁不留缝隙,以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松,塞好后,以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内,上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札,准备灭菌。

6、制作斜面培养基和平板培养基

培养基灭菌后,如制作斜面培养基和平板培养基,须趁培养基未凝固时进行。

扩展资料

培养基的配置原则:

1、选择适宜的营养物质  

总体而言,所有微生物生长繁殖均需要培养基含有碳源、氮源、无机盐、生长因子、水及能源,但由于微生物营养类型复杂,不同微生物对营养物质的需求是不一样的,因此首先要根据不同微生物的营养需求配制针对性强的培养基。

2、营养物质浓度及配比合适  

培养基中营养物质浓度合适时微生物才能生长良好,营养物质浓度过低时不能满足微生物正常生长所需,浓度过高时则可能对微生物生长起抑制作用,例如高浓度糖类物质、无机盐、重金属离子等不仅不能维持和促进微生物的生长,反而起到抑菌或杀菌作用。

3、控制pH条件  

培养基的pH必须控制在一定的范围内,以满足不同类型微生物的生长繁殖或产生代谢产物。各类微生物生长繁殖或产生代谢产物的最适pH条件各不相同,一般来讲,细菌与放线菌适于在pH7-7.5范围内生长,酵母菌和霉菌通常在pH4.5-6范围内生长。

4、控制氧化还原电位(redox potential)  

不同类型微生物生长对氧化还原电位(F)的要求不一样,一般好氧性微生物在F值为+0.1V以上时可正常生长,一般以+0.3一+0.4V为宜,厌氧性微生物只能在F值低于+0.1V条件下生长,兼性厌氧微生物在F值为+0.1V以上时进行好氧呼吸,在+0.1V以下时进行发酵。

5、原料来源的选择 

在配制培养基时应尽量利用廉价且易于获得的原料作为培养基成分,特别是在发酵工业中,培养基用量很大,利用低成本的原料更体现出其经济价值。

6、灭菌处理  

要获得微生物纯培养,必须避免杂菌污染,因此对所用器材及工作场所进行消毒与灭菌。对培养基而言,更是要进行严格的灭菌。对培养基一般采取高压蒸汽灭菌,一般培养基用1.05kg/cm2,121.3℃条件下维持15-30min可达到灭菌目的。



参考资料来源:百度百科—培养基



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配置培养基的基本步骤有哪些?应注意什么问题
答:培养基的配置应该注意的几大步骤:1、常用玻璃仪器的准备制备培养基所用的吸管、锥形瓶、毛细吸管、平皿等玻璃仪器用前要用肥皂水洗刷后用清水冲洗干净,晾干后备用。(1)平皿用纸或布包好,或装在金属盒内,于121℃高压蒸汽菌3min后烘干,备用。(2)试管管口用棉花塞或硅氟塑料试管塞塞好,再用...

培养基配置的步骤是什么?
答:二、培养基制备过程 不同的培养基其制备方法也不同,一般包括以下步骤:(一)准确称量试剂 根据不同的菌类和用途,选择适宜的培养基,培养基所需试剂必须纯净。(二)校正pH值 将称量好的培养基各种成分放入容器内,标记划线,加热溶解,补充水分,测定酸碱度,常用pH6.8~8.0的精密试纸或酸度计测定...

培养基的配制过程
答:2、准备试剂和仪器,制备培养基需要一些试剂和仪器,如称量器、搅拌器、pH计等。3、配制用水,可用蒸馏水、去离子水等,电阻率不小于30万Ωcm,每批应检查一次。4、自行配制的培养基,各营养成分应按要求顺序加入,避免产生沉淀。5、称量好的干粉培养基应先溶解再高压灭菌。自行配制的培养基应完全溶解...

如何配置培养基?
答:三、培养基的配制步骤 1. 准备试剂和仪器:准备培养基所需的试剂和仪器,保证其干燥和无菌。2. 称量试剂:按照配方要求,依次称取所需试剂,并将其分别加入蒸馏水中。3. 混合均匀:用磁力搅拌器将培养基混合均匀,直到试剂完全溶解。4. 调节pH值:用pH计测量培养基的pH值,如有需要,可添加适量的...

固体培养基的制备
答:2、称量原料:按照配方比例,准确称量所需的原料。对于固体培养基,琼脂的用量通常为1.5-2%,而其他成分的比例则根据具体配方确定。3、混合原料:将称量好的原料放入烧杯中,加入适量的水,搅拌均匀。对于一些需要加热或溶解的成分,如琼脂,可以在此步骤中加入并加热至完全溶解。4、灭菌和倒平板:将混合...

制作培养基的步骤
答:固体斜面培养基一般装3-4ml,约试管的1/5高度。6、包扎:分装好后,塞上棉塞,在用牛皮纸将棉塞包裹好,防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。7、灭菌:按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高,营养成分会被破坏,培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。8、摆斜面:灭菌后...

微生物的培养基制作包括哪几个步骤?
答:一般步骤是:1、计算 2、称量药品,如牛肉膏、蛋白胨;3、溶化 按照顺利加入,防治沉淀产生;对于可溶性淀粉,先用少量冷水调成糊状,再放入沸水中。琼脂溶化温度96℃,凝固温度~40 ℃。4、调pH值 5、分装 6、加塞;7、包扎:注明培养基的名称、组别、配制日期;8、灭菌 。0.1MPa,121℃,灭菌20...

配制培养基的流程
答:1、配制溶液。向容器内加入所需水量的一部分,按照培养基的配方,称取各种原料,依次加入使其溶解,最后补足所需水分;2、调节pH值。测试培养基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH进行调节,直到调节到配方要求的pH值为止;3、过滤。用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤;4、分装。

培养基制备的流程
答:培养基制备的流程如下:向容器内加入所需水量的一部分,按照培养基的配方,称取各种原料,依次加入使其溶解,最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质,需加热溶解,加热过程所蒸发的水分,应在全部原料溶解后加水补足。用pH试纸(或pH电位计、氢离子浓度比色计)测试培养基的pH值,如不符合需要,可用...

培养基的配制过程
答:培养基的pH值和渗透压要控制在适宜范围内,以保证微生物的生长。在灭菌过程中要确保容器密封良好,避免培养基泄漏或灭菌不完全。配制好的培养基要尽快使用,并及时进行储存和记录。总之,培养基的配制需要认真准备、精确称量、充分搅拌和混合、正确灭菌等步骤,以确保培养基的质量和微生物生长的条件。