马铃薯培养基的制作过程 马铃薯培养基怎样制备?

作者&投稿:兆姣 (若有异议请与网页底部的电邮联系)

(1)称量和熬煮

按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中,加水1000ml,在加热器上加热至沸腾,维持20-30min,用可用2层纱布趁热在量杯上过滤,滤渣弃取。滤液补充水分到1000ml。

(2)加热溶解

把滤液放入锅中,加入葡萄糖20g,琼脂15~20g(提前搞碎),然后放在石棉网上,小火加热,并用玻棒不断搅拌,以防琼脂糊底或溢出,待琼脂完全溶解后,再补充水分至所需量。

(3)分装

按实训要求,将配制的培养基分装入试管或500ml三角瓶内。分装时可用三角漏斗以免使培养基沾在管口或瓶口上造成污染。

分装量:固体培养基约为试管高度的1/5,灭菌后制成斜面,分装入三角瓶内以不超过其容积的一半为宜;半固体培养基以试管高度的1/3为宜,灭菌后垂直待凝。

(4)加棉塞

培养基分装完毕后,在试管口或三角烧瓶口上塞上棉塞(或泡沫塑料塞或试管帽等),以阻止外界微生物进入培养基内造成污染,并保证有良好的通气性能。

(5)包扎

加塞后,将全部试管用麻绳或橡皮筋捆好,再在棉塞外包一层牛皮纸,以防止灭菌时冷凝水润湿棉塞,其外再用一道线绳或橡皮筋扎好,用记号笔注明培养基名称、组别、配制日期。

扩展资料

防止污染应该注意以下事项:

确认工作细胞库是否被污染,确认毒种工作种子批是否被污染,确认所用培养基及其添加成分(如小牛血清、NaHCO3等)是否被污染,均可用细菌、真菌及支原体无菌试验来确认并排除。同时要对无菌试验培养基的灵敏度进行验证。实际生产中,可以从配制好的培养液中取少量加入营养琼脂于恒温培养箱内培养,48小时即可观察有无污染。

其它:高压灭菌设备、过滤除菌设备均应进行验证,确保灭菌和除菌效果;前者应在投产前及其后的每6个月进行验证,后者应在每次除菌前、后进行验证工作(至少应在除菌后进行一次)。

另外,应将有毒区与无毒区严格分开,并有各自独立的空气净化系统及孵室,有毒区对无毒区应保持相对负压,防止病毒对培养细胞(尤其是细胞库)的污染。



材料:
  马铃薯20g、蔗糖 2g、自来水 100mL、琼脂 2g、pH 自然(约6.0)
  灭菌:1.05kg/cm2,20min
  马铃薯处理方法:
  马铃薯去皮,切成块加水,煮沸30min(注意火力的控制,可适当补水) ,用纱布过滤,滤液加糖,补足水至100ml,装入三角瓶。
  综合马铃薯培养基 20%马铃薯煮汁 1000 毫升 磷酸二氢钾 3克 硫酸镁 1.5克 葡萄糖 20克 维生素 10毫克 琼脂 18克 先配制20%马铃薯煮汁,方法同上。在煮汁中加入上述各种组分,加热溶解后补足水分,调整pH值到6。分装,灭菌,备用。 该培养基用于培养和保存灵芝、平菇、香菇等食用菌菌种。马铃薯糖琼脂培养基 把马铃薯洗净去皮,取200克切成小块,加水1000毫升,煮沸半小时后,补足水分。在滤液中加入10克琼脂,煮沸溶解后加糖20克(用于培养霉菌的加入蔗糖,用于培养酵母菌的加入葡萄糖),补足水分,分装,灭菌,备用。 把这培养基的pH值调到7.2~7.4,配方中的糖,如用葡萄糖还可用来培养放线菌和芽孢杆菌。 按所用原料不同,可分为两类:应用肉汤、马铃薯汁等天然成分配制的,称为天然培养基;应用化学药品配成并标明成分的,称为合成培养基或综合培养基。马铃薯培养基就是天然培养基,综合马铃薯培养基就是人工合成的。
  不同的生物需要不同培养基,注意配方的选取,称取要准确,误差不能太大对于特殊物品,不能灭菌的要用过滤方法除菌。配好后高温高压灭菌,可以在室温下放置很久,如果打开使用过一次,请放置冰箱。如果长时间不用,一定要重新配置,不能拿以前的用来培养,避免污染。
  培养基的制备程序不同类型培养基制备的程序也不尽相同。但一般培养基的程序主要可分为:配料、溶化、矫正pH、澄清过滤、分装、灭菌及检定等8个步骤。
  (一)配料
  按培养基处方准确称取各种成分,先在三角烧瓶中加入少量蒸馏水,再加入各种成分,以防蛋白胨等粘附于瓶底,然后再以剩余的水冲洗瓶壁。
  (二)溶化
  将各种成分混匀于水中,最好以流通蒸气溶化半小时,如在电炉上溶化应随时搅拌,如有琼脂成分时更应注意防止外溢。溶化完毕,补足失去的水分。
(三)矫正pH

  1.pH测定
  取与标准管同口径的试管(通常用华氏试管)3支,于第1、3管各加入欲测定pH的的培养基5ml,并于第一管中加入0.2g/L的酚红0.25ml作为测定管,混匀;于第2管加入蒸馏水5ml,第4管为pH标准比色管。
  2.pH的校正
  若测定管过酸或过碱可用0.1mol/L氢氧化钠或0.1mol/L盐酸溶液矫正,直至颜色与标准管相同为止,加碱或加酸时要精确缓慢,每加1滴后要充分混匀,比色后再加第2滴(有时仅加半滴)准确记录加入的量。
  3.计算
  设5ml培养基矫正pH至7.4时需0.1mol/L氢氧化钠0.15ml,现有培养基4990ml,需加氢氧化钠的量可按下列方法计算:5∶4990=0.15∶X
  X=0.15×4990/5=149.7(ml)
  如将此0.1mol/L的氢氧化钠改用1mol/L的氢氧化钠时,则需14.9ml即可。
  (四)过滤澄清
  培养基配制后一般都有沉渣或混浊出现,需过滤成清晰透明后方可使用,常用的过滤方法如下:
  1.液体培养基
  液体培养基必须清晰,以便观察细菌的生长情况,常用滤纸过滤,亦可在加热前加入用水稀释的鸡蛋白(1000ml培养基用1个鸡蛋白)在100℃加热后保持60~70℃40~60分钟,使其不溶性物质附于凝固的蛋白上而沉淀,然后再用虹吸法吸出上清液或以滤纸过滤。
  2.固体培养基
  如系琼脂培养基,于加热融化后需趁热以绒布或两层纱布中夹脱脂棉过滤;亦可用
自然沉淀法,即将琼脂培养基盛人铝锅或广口搪瓷容器内,以高压(103.43kPa)蒸汽融化15分钟后,静置高压锅内过夜,次日将琼脂倾出,用刀将底部沉渣切去,再融化即可收清晰的琼脂培养基。

  (五)分装
  1.根据需要将培养基分装于不同容量的三角烧瓶、试管中。分装的量不宜超过容器的2/3以免灭菌时外溢。
  2.琼脂斜面分装量为试管容量的1/5,灭菌后须趁热放置成斜面,斜面长约为试管长的2/3.
  3.半固体培养基分装量约为试管长的1/3,灭菌后直立凝固待用。
  4.高层琼脂分装量约为试管的1/3,灭菌后趁热直立,待冷后凝固待用。
  5.液体培养基分装于试管中,约是试管长度的1/3.
  6.琼脂平板:将灭菌(或加热融化)后的培养基冷至50℃左右,以无菌手续倾人灭菌平皿内,内径225px的平皿倾注培养基约13~15ml,轻摇平皿底,使培养基平铺于平皿底部,待凝固后即成,倾注培养基时,切勿将皿盖全部启开,以免空气中尘埃及细菌落入。
  新制成的平板培养基(简称平板),表面水分较多,不利于细菌的分离,通常应将平皿倒扣搁置于37℃培养箱内约30分钟待平板平面干燥后使用。



马铃薯培养基的配方是什么?~

马铃薯200g
葡萄糖20g
琼脂15~20g
水1000mL
将200g马铃薯去皮切碎,煮烂后取得土豆汁,加入20g葡萄糖或者蔗糖,加入琼脂15~20g,加水至1000mL,121℃灭菌即可

成分表(单位g/L):
马铃薯粉 6.0
葡萄糖 20.0
氯霉素 0.1
琼脂 20.0
以上成分中加入 1000ml 蒸馏水中,121℃高压灭菌 20分钟

食用菌母种制作技术
答:在食用菌生产中,母种的培养是至关重要的一环。母种质量的优劣,直接影响到食用菌产量的高低和栽培的成败。下面我给大家分享了食用菌母种制作技术,一起来了解一下吧!食用菌母种制作技术 制作培养基 先将新鲜无病害的马铃薯洗净,去皮后切成小薄片,称200克,加水1000毫升,煮沸20分钟后过滤,其滤汁...

一级种培养基配方有几种?如何制作?
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问一下制作PDA培养基过程中把装有土豆的烧杯放在电磁炉中煮行吗?不过...
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食用菌母种培养基配方
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香菇制种
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一级菌种培养基常用的配方是什么
答:(1)一级种培养基配方马铃薯葡萄糖琼脂培养基(PDA培养基):去皮马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克。水1000毫升,酸碱度自然。马铃薯综合培养基(CPDA培养基):去皮马铃薯200克,葡萄糖20克,磷酸二氢钾3克,硫酸镁1.5克,维生素B10.05毫克,琼脂20克,水1000毫升,酸碱度自然。马铃薯酵母膏...

制作培养基的步骤
答:固体斜面培养基一般装3-4ml,约试管的1/5高度。6、包扎:分装好后,塞上棉塞,在用牛皮纸将棉塞包裹好,防止灭菌时水份进入把棉塞弄湿。7、灭菌:按配方上要求的温度、压力进行高压蒸汽灭菌。如果灭菌的温度太高,营养成分会被破坏,培养基中的糖、氨基酸会使培养基的颜色变深。8、摆斜面:灭菌后...