固体培养基的制作流程 MS固体培养基的制作流程

作者&投稿:强叛 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
1 加热,将琼脂融化
2 如果是要做试管,就加分装3ml培养基到试管,塞上试管塞,如果是做平板,就将培养基倒入锥形瓶中
3 按照培养基规定的灭菌方式灭菌
4 如果是斜面,则将灭菌后的试管放成一个梯度,是培养基形成一个斜面,如果是平板,就趁培养基凝固前将其倒入平板中,每个大约25ml,平板放置5min左右凝固后即可。

计算、称量、溶解、灭菌、冷却、无菌分装、无菌检验

配料、灭菌、冷却、分装、包装

一、实验所需的仪器设备和用具.
二、实验安排与要求:将全班若干小组(6-7人),每小组配制500 mlMS固体培养基,
三、边示范边讲解实验方法和步骤
1、计算并填写培养基成分单
计算公式:∨母液=∨配制÷母液倍数
∨激素=∨配制×培养基中所要求的激素浓度÷激素母液浓度
2.每组取500ml的烧杯一只,加300ml蒸馏水,用天平称4g琼脂放入蒸馏水中,在电炉上加热溶解.称15g蔗糖放入溶解的琼脂中.
3.按配方取出各种母液,放入到溶解后的琼脂和蔗糖溶液中,用玻璃棒搅动混合,并加蒸馏水定容至500ml.
4.用1mol/L的NaOH或1mol/LHCL将PH值调至5.8,可用PH精密试纸或酸度计测定.
5.用培养基分装用具将500ml的培养基分注于15个所选用的培养瓶中.
6.用封口膜、棉塞或其它封口物包扎瓶口,并做好标记.
7.把分装好的培养基及所需灭菌的各种用具、蒸馏水等,放入高压灭菌锅的消毒桶内,将外层锅内加水至水位线.盖好锅盖,上好螺丝,接通电源升温.待锅内温度达100.C(0.05kgf/cm2或0.005MPa)左右时,打开排气阀排净锅内冷空气,然后关闭排气阀,继续加热至温度达到121.C(1.05kgf/cm2或0.103MPa)时,维持20~30min即可切断电源,让锅内气压自然下降,当压力降到零点后,打开排气阀,排出剩余蒸汽,再打开锅盖取出培养基及灭菌物品.
8.培养基及灭菌物品在室温下自然冷却后,存放于阴凉干燥洁净处待用.
四、总结高压蒸汽灭菌的原理和一般操作步骤实验

配制培养基的步骤?~

1、配制溶液
向容器内加入所需水量的一部分,按照培养基的配方,称取各种原料,依次加入使其溶解,最后补足所需水分。对蛋白胨、肉膏等物质,需加热溶解,加热过程所蒸发的水分,应在全部原料溶解后加水补足。
配制固体培养基时,先将上述已配好的液体培养基煮沸,再将称好的琼脂加入,继续加热至完全融化。并不断搅拌,以免琼脂糊底烧焦。
2、调节pH值 
用pH试纸(或pH电位计、氢离子浓度比色计)测试培养基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH进行调节,直到调节到配方要求的pH值为止。
3、过滤
用滤纸、纱布或棉花趁热将已配好的培养基过滤。用纱布过滤时,最好折叠成六层,用滤纸过滤时,可将滤纸折叠成瓦棱形,铺在漏斗上过滤。
4、分装
已过滤的培养基应进行分装。如果要制作斜面培养基,须将培养基分装于试管中。如果要制作平板培养基或液体、半固体培养基,则须将培养基分装于锥形瓶内。
分装时,一手捏松弹簧夹,使培养基流出,另一只手握住几支试管或锥形瓶,依次接取培养基。分装时,注意不要使培养基粘附管口或瓶口,以免浸湿棉塞引起杂菌污染。
装入试管的培养基量,视试管和锥形瓶的大小及需要而定。一般制作斜面培养基时,每只15×150毫米的试管,约装3~4毫升(1/4~1/3试管高度),如制作深层培养基,每只20×220毫米的试管约装12~15毫升。每只锥形瓶装入的培养基,一般以其容积的一半为宜。
5、加棉塞 
分装完毕后,需要用棉塞堵住管口或瓶口。堵棉塞的主要目的是过滤空气,避免污染。棉塞应采用普通新鲜、干燥的棉花制作,不要用脱脂棉,以免因脱脂棉吸水使棉塞无法使用。
制作棉塞时,要根据棉塞大小将棉花铺展成适当厚度,揪取手掌心大小一块,铺在左手拇指与食指圈成的圆孔中,用右手食指插入棉花中部,同时左手食指与姆指稍稍紧握,就会形成1个长棒形的棉塞。
棉塞作成后,应迅速塞入管口或瓶口中,棉塞应紧贴内壁不留缝隙,以防空气中微生物沿皱折侵入。棉塞不要过紧过松,塞好后,以手提棉塞、管、瓶不下落为合适。棉塞的2/3应在管内或瓶内,上端露出少许棉花便于拔取。塞好棉塞的试管和锥形瓶应盖上厚纸用绳捆札,准备灭菌。
6、制作斜面培养基和平板培养基
培养基灭菌后,如制作斜面培养基和平板培养基,须趁培养基未凝固时进行。

(1)制作斜面培养基。在实验台上放1支长0.5~1米左右的木条,厚度为1厘米左右。将试管头部枕在木条上,使管内培养基自然倾斜,凝固后即成斜面培养基。
(2)制作平板培养基。将刚刚灭过菌的盛有培养基的锥形瓶和培养皿放在实验台上,点燃酒精灯,右手托起锥形瓶瓶底,左手拔下棉塞,将瓶口在酒精灯上稍加灼烧,左手打开培养皿盖,右手迅速将培养基倒入培养皿中,每皿约倒入10毫升,以铺满皿底为度。
铺放培养基后放置15分钟左右,待培养基凝固后,再5个培养皿一叠,倒置过来,平放在恒温箱里,24小时后检查,如培养基未长杂菌,即可用来培养微生物。
参考资料来源:百度百科—培养基

一、实验所需的仪器设备和用具。

二、实验安排与要求:将全班若干小组(6-7人),每小组配制500 mlMS固体培养基,

三、边示范边讲解实验方法和步骤

1、计算并填写培养基成分单

计算公式:∨母液=∨配制÷母液倍数

∨激素=∨配制×培养基中所要求的激素浓度÷激素母液浓度

2. 每组取500ml的烧杯一只,加300ml蒸馏水,用天平称4g琼脂放入蒸馏水中,在电炉上加热溶解。称15g蔗糖放入溶解的琼脂中。

3. 按配方取出各种母液,放入到溶解后的琼脂和蔗糖溶液中,用玻璃棒搅动混合,并加蒸馏水定容至500ml。

4. 用1mol/L的NaOH或1mol/LHCL将PH值调至5.8,可用PH精密试纸或酸度计测定。

5. 用培养基分装用具将500ml的培养基分注于15个所选用的培养瓶中。

6. 用封口膜、棉塞或其它封口物包扎瓶口,并做好标记。

7. 把分装好的培养基及所需灭菌的各种用具、蒸馏水等,放入高压灭菌锅的消毒桶内,将外层锅内加水至水位线。盖好锅盖,上好螺丝,接通电源升温。待锅内温度达100。C(0.05kgf/cm2或0.005MPa)左右时,打开排气阀排净锅内冷空气,然后关闭排气阀,继续加热至温度达到121。C(1.05kgf/cm2或0.103MPa)时,维持20~30min即可切断电源,让锅内气压自然下降,当压力降到零点后,打开排气阀,排出剩余蒸汽,再打开锅盖取出培养基及灭菌物品。

8. 培养基及灭菌物品在室温下自然冷却后,存放于阴凉干燥洁净处待用。

四、总结高压蒸汽灭菌的原理和一般操作步骤实验

马铃薯培养基的制作过程
答:(1)称量和熬煮 按培养基配方逐一称取去皮土豆。土豆切成小块放入锅中,加水1000ml,在加热器上加热至沸腾,维持20-30min,用可用2层纱布趁热在量杯上过滤,滤渣弃取。滤液补充水分到1000ml。(2)加热溶解 把滤液放入锅中,加入葡萄糖20g,琼脂15~20g(提前搞碎),然后放在石棉网上,小火加热,并...

如何生产蘑菇一级菌种培养基?
答:④试管取出后趁热将试管口一端垫高,斜靠在桌上的小木棒上,使管内培养液斜面上长度达4/5,试管上面覆盖毛巾,冷却后即成斜面固体培养基。⑤灭菌后置常温下48小时,未发现有杂菌产生,即可作为一级种斜面培养基用于接种、培养,长满蘑菇菌丝体斜面试管即是蘑菇一级种。琼脂斜面培养基配制工艺流程如图4...

一级种培养基配方有几种?如何制作?
答:上述3种培养基配方,适于培养银耳芽孢萌发,有利于与耳友菌丝混合发育生长。(4)银耳木屑菌种2瓶(750毫升),过磷酸钙1克或磷酸二氢钾3克,琼脂25克,水1000毫升。配制时将菌种瓶中的菌丝体挖出,置于1000毫升水锅中,烧开后再煮10~15分钟,过滤去渣取用滤汁,不足1000毫升的加水补足。再加入琼脂...

请告诉我MHA培养基的具体制作步骤(不是配方),万分感谢
答:按实验要求,可将配制的培养基分装入试管内或三角烧瓶内。分装装置见图Ⅴ-1。分装过程中注意不要使培养基沾在管口或瓶口上,以免沾污棉塞而引起污染。(1)液体分装分装高度以试管高度的1/4左右为宜。(2)固体分装分装试管,其装量不超过管高的1/5,灭菌后制成斜面。分装三角烧瓶的量以不超过三角...

原生质体的固体培养法有哪些步骤?
答:固体培养的步骤为:原生质体移入培养基→1体积含原生质体的培养基与1体积含琼脂(40摄氏度)的培养基混合→倒转培养皿在25摄氏度下培养→原生质体重新产生细胞壁并分裂成细胞团→细胞团于琼脂糖基质中传代培养,培养基中减少渗压剂以利于愈伤组织的形成→诱导分化成植物的根、茎。

MS固体培养基的制作流程
答:一、实验所需的仪器设备和用具.二、实验安排与要求:将全班若干小组(6-7人),每小组配制500 mlMS固体培养基,三、边示范边讲解实验方法和步骤 1、计算并填写培养基成分单 计算公式:∨母液=∨配制÷母液倍数 ∨激素=∨配制×培养基中所要求的激素浓度÷激素母液浓度 2.每组取500ml的烧杯一只,加...

琼脂培养基怎么制作的?
答:为了使食用菌能正常生长发育,培养基除了必须有足够的碳、氮营养外,还应注意碳与氮的比例(碳氮比,C/N)。这样既能保证营养生长阶段对营养的需要,也能保证生殖生长的顺利进行。例如,巴西蘑菇培养料适宜的碳氮比(C/N)为28~30∶1,含氮量1.4%~1.6%,投料量30~35千克/米2。我们可以按照...

PDA培养基的配制方法
答:马铃薯 200克 葡萄糖 20克琼脂 15~20克 自来水 1000毫升自然PH 1.培养基经灭菌后,必须放在37C温箱培养24h,无菌生长者方可使用。2.PDA培养基一般不需要调pH。对于要调节pH的培养基,一般用pH试纸测定其pH。如果培养基偏酸或偏碱时,可用lmol/LNaOH或lmol/LHCL溶液进行调节。调节时应逐滴加入...

如何做细菌培养基。详细材料及步骤有那些 ?
答:培养基常用牛肉汤、蛋白胨、氯化钠、葡萄糖、血液等和某些细菌所需的特殊物质配制成液体、半固体、固体等。一般细菌可在有氧条件下,37℃中放18~24小时生长。厌氧菌则需在无氧环境中放2~3天后生长。个别细菌如结核菌要培养1个月之久。由于细菌无处不在,因此从制备培养基时开始,整个培养过程必须按...

选择培养基的配制原理
答:4流程 称药品→溶解→调ph值→融化琼脂→过滤分装→包扎标记→灭菌→摆斜面或倒平板。5步骤 5.1培养基的制备 5.1.1称量药品 根据培养基配方依次准确称取各种药品,放入适当大小的烧杯中,琼脂不要加入。蛋白胨极易吸潮,故称量时要迅速。5.1.2溶解 用量筒取一定量(约占总量的1/2)蒸馏水倒入...