慢病毒的相关实验 求助慢病毒转染完之后的实验设计方案

1. 根据目的基因相关信息（序列，序列号等），构建含有外源基因或siRNA的重组载体；
2. 对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量的不含内毒素的重组质粒；
3. 使用高效重组载体和病毒包装质粒共转染293T 细胞，进行病毒包装和生产，收集病毒
液；
4. 浓缩、纯化病毒液；
5. 用高质量的病毒液感染细胞；
6. 通过定量PCR精确测定病毒滴度（高精确滴定方法）和Western 分析实验结果；
7. 用高质量的病毒液感染宿主细胞；检测基因功能或者siRNA的沉默效率以及使用药物进
行稳定转染细胞株的筛选，通常状况下，筛选的细胞克隆株具有长期的表达稳定
性。病毒液足够用于一般的动物活体实验。

本人要做相关慢病毒载体的实验，有哪位大侠知道哪个公司在慢病毒载体构建表达方面做的比较好么~

上海吉凯基因好像做得不错，有朋友在这家公司做过，还有动物实验，结果挺好，收费相对其他会低点！

细胞系预实验-MOI 的确定
预实验的目的是了解所操作细胞被慢病毒载体感染的容易程度，另一方面在一些情况下虽然慢病毒已经感染进入细胞，但由于表达标记基因的启动子在该细胞内的表达效率不高，没能观察到感染现象。我们在预实验方案中加入不同启动子的病毒进行感染，并且用定量PCR测定感染后细胞内整合病毒，这样即使病毒没有表达也可以观察感染。
感染前一天接种，使得第二天细胞汇合度为30-40%。培养板可以是96孔板（只通过显微镜观察荧光）或是24孔板（通过流式或是定量PCR确定感染比例）。
2. 设置不同MOI值的感染组，通常设立1，2，5，10，20，50，100的感染组别，各做两个孔，一个孔中加入终浓度为5 μg/ml的polybrene，另一组不加。Polybrene可以促进病毒对细胞的侵染，但在少数情况下它对细胞有伤害。常用的对照病毒包括CMV-GFP，EF1a-GFP，UbiC-GFP，PGK-GFP。一般细胞里面CMV启动子的表达活性是最强的，但在血液来源的一些癌细胞中EF1a的表现要优于CMV。UbiC在一般细胞中都表达，但表达活性一般要低一些，它在神经元等原代细胞的感染中是最好的。
3. 12-24小时后，将培养上清丢掉同时除去没有感染细胞的病毒，更换为新鲜的培养基。
4. 感染3-4天后可以在荧光显微镜下观察，细胞应当会被感染并表达荧光。细胞感染的比例可以通过拍照目测估计或是根据图片数数计算。
5. 如果是用24孔板做的预实验，则可以用消化液将细胞消化成单个，通过流式细胞法得到每个感染复数下被感染细胞比例，此时注意设置空细胞组用于对照。
6. 也可以将消化下来的细胞抽提基因组DNA，用滴度测定中介绍的定量PCR方法得到整合病毒和细胞的比例。注意如果是所感染为动物细胞则需要用相应物种的内参基因。
当后期实验用的细胞培养面积与预实验不同时，则需要放大感染系统。实验体系放大的原则是保持细胞的密度一致，按照底面积增加病毒用量，同时保持培养基和底面积的比例就可以达到与预实验一致的感染效果。当细胞密度与预实验有出入时，如果细胞密度变大，则相应增加病毒用量，如果细胞密度变小，则保持病毒用量不变。

抗体连接新冠病毒的S蛋白,进而阻止新冠病毒进入细胞,如何设计实验证明...
答：病毒中和试验，将新冠病毒与抗体混合孵育一定时间，然后将混合物加入到具有ACE2受体的细胞中。对照组为新冠病毒直接加入到细胞中。试验结果为，对照组细胞发生病变，而实验组未发生病变，则可证明抗体中和了新冠病毒并阻止病毒感染细胞。将SDS-PAGE电泳后的ACE2受体蛋白固定于纤维膜上，试验组：用抗体与病毒...

如图是研究小鼠被LCM病毒感染的相关实验,请据图分析回答下列问题:(1...
答：发挥免疫效应．（2）向培养液中加入被LCM病毒感染的51Cr标记的同种小鼠细胞的目的是使小鼠感染病毒后成为靶细胞，并被标记上51Cr，和效应T细胞结合后，靶细胞裂解，释放出51Cr，从而证明了效应T细胞在细胞免疫中的作用．故答案为：（1）淋巴B细胞 淋巴因子 抗体 体液免疫（2）提供靶细胞 靶细胞...

慢病毒的相关实验
答：1. 根据目的基因相关信息（序列，序列号等），构建含有外源基因或siRNA的重组载体；2. 对于测序正确的重组质粒，提取和纯化高质量的不含内毒素的重组质粒；3. 使用高效重组载体和病毒包装质粒共转染293T 细胞，进行病毒包装和生产，收集病毒液；4. 浓缩、纯化病毒液；5. 用高质量的病毒液感染细胞；6....

植物病毒重建实验原理
答：植物病毒重建实验原理是比对。根据查询相关信息资料：植物病毒的拆分与重建实验在于将TMV(烟草花叶病毒)放在一定浓度的苯酚溶液中振荡，就能将蛋白质外壳与RNA核心相分离。结果发现裸露的RNA也能感染烟草，并使其患典型症状，在病斑中还能分离到完整的TMV粒子，这就是著名的烟草花叶病毒的重建实验。

汉坦病毒的实验诊断
答：汉坦病毒实验诊断方面的研究，主要集中于重组抗原的应用和实验诊断方法的快速、敏感和特异。F.Elgh等采用PUU病毒重组核蛋白作为抗原，与乳胶连接进行乳胶微粒凝集试验，用于汉坦病毒病的快速血清学诊断，与采用PUU病毒重组核蛋白作为抗原的ELISA相比，特异性为90%，敏感性为94%。Jiro Arikawa等将杆状病毒表达...

烟草花叶病毒(简称TMV)感染烟草叶片能使叶片上出现斑点,从而降低烟叶...
答：（1）病毒结构非常简单，无细胞结构，只有蛋白质的外壳和内部的遗传物质．（2）病毒很小，能够过，过滤到汁液中，从而感染病毒．（3）在有病斑的烟叶中提取分离后获得的病毒应该是烟草花叶病毒，此实验可以说明RNA具有遗传作用．病毒不能自养，只能寄生在生物的活细胞中．靠自己的遗传物质，利用活细胞内的...

模拟病毒传播全球的速度
答：近日，芬兰阿尔托大学等四个科研机构进行了一项病毒传播模拟实验。实验显示，如果有新冠肺炎患者在超市这样的密闭空间里咳嗽，病毒就能瞬间沿着过道扩散开来。1分钟后，病毒就蔓延到了整个通道，并且穿过货架。2分钟后，病毒就扩散到了旁边的过道。6分钟过后，病毒的浓度有所下降，但是并没有完全消失...

病毒灭活能力测试哪里能做?
答：哪里有病毒灭活能力测试的单位？中科检测 具有P2级实验室及联合P3/P4级实验室，可根据不同消毒产品类型制定测试方案，出具行业认可的病毒灭活试验报告。病毒灭活试验方法 目前病毒灭活的常规验证和确认方法，大多采用病毒感染细胞、组织、实验动物和鸡胚等进行间接检测。这些方法中涉及的感染试验均是以活病毒来...

新冠病毒检测方法是抗体检测准确还是核酸准确
答：这种技术对于目前新冠病毒的初期发现和判断有很好的作用和帮助。但缺点是高灵敏度的RT-PCR仪价格不菲，对相关实验室的洁净度和操作人员要求也较高，且检测时间较长，一个检测通常会需要4-6个小时才有结果。二：抗原检测有比核酸检测更快的初步检验结果，但缺点在于准确度较低。抗原检测在测试结果上可以...