怎样配制母液和培养基? 为什么要先配母液,然后用母液配制培养基?母液和培养基的关系

作者&投稿:佟天 (若有异议请与网页底部的电邮联系)

配制培养基是花卉组织培养的首要环节。培养基的成分随着花卉的种类、不同的外植体、不同的培养阶段应当有所不同。一般来说,各种培养基都有大量元素、微量元素、维生素、激素、糖和琼脂等物质,有时还要在培养基里添加有机附加物,如活性炭、香蕉汁、椰子汁等。在生产上,首先选用已有的培养基配方,它是前人研究的成果,又是经过生产实践验证的。现在几乎各种花卉用的营养基配方都有,可以免去您再研究的麻烦,当然在生产实践中,也可适当改进。如果您找不到合适的配方,可先试用MS培养基,MS是Murashige和Skoog的缩写,他们二人于1962年研究出来了这种培养基。下面以MS培养基为例,介绍怎样配制。

(1)配制母液。把培养基中的必需元素按原配方量的50倍、100倍或1 000倍称量后制成一种浓溶液,这种浓溶液叫母液。在配制培养基时按比例分别量取母液稀释到所需的浓度即可。母液配好后贴上标签,放在0~4℃的冰箱中,可使用半年到1年,这样做可节省许多时间。可能产生化学反应的或溶解后产生沉淀的,不能放在同一个容器中。配制母液要用重蒸馏水。药物要使用分析纯或等级较高的化学纯。药物的称量和药液的定容都要准确。母液①:硫酸镁18.5克,硝酸铵82.5克,硝酸钾95.0克。加水定容到1000毫升,浓度为培养基的50倍,配1升培养基时量取20毫升母液。母液②:氯化钙22.0克。加水定容到500毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。母液③:磷酸二氢钾8.5克。加水定容到500毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。母液④:乙二胺四乙酸二钠3.73克,硫酸亚铁2.78克。加水定容到1000毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。母液⑤:硼酸620毫克,硫酸锰2230毫克,硫酸锌860毫克,硫酸铜2.5毫克,碘化钾83毫克,钼酸钠25毫克,氯化钴2.5毫克。加水定容到1000毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。母液⑥:肌醇5克,甘氨酸100毫克,烟酸25毫克,盐酸吡哆醇25毫克,盐酸硫胺素5毫克。加水定容到500毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。

(2)配制培养基。配制每1000毫升培养基,称取6~10克琼脂作凝固剂,具体按配方要求称量,放在水浴锅上慢慢溶解。先在量筒内放入一定量的水,按照母液顺序和规定量,量取母液。当母液加完后,根据需要每升培养基再加入生长调节物质如吲哚乙酸或萘乙酸等,细胞分裂素类0.04~10毫克,细胞分裂素应用最多的是6-苄基腺嘌呤,加完后倒入已熔化的琼脂中。每1000毫升培养基加入蔗糖30克或根据要求确定,定容到所需的体积。继续加温,直到琼脂完全熔解。用盐酸或氢氧化钠对培养基的pH进行调节,多数培养基的pH在5.4~6.0之间,MS培养基的pH为5.7。将配好的培养基趁热倒入培养容器中,培养基占容器体积的1/3~1/4。不要将培养基沾到容器壁上,否则容易被杂菌感染。然后及时加盖,进行高压灭菌,灭菌时要按高压灭菌锅的操作规程使用。在121℃、压力111千帕下维持15~20分钟,温度和时间都要严格控制。到时间后立即切断电源,当高压锅内压力降到常压后,开启放气阀,打开锅盖,取出灭菌好的培养基,放在接种室中培养3天,没被感染后才能用来组织培养。



怎样配制母液和培养基?~

配制培养基是花卉组织培养的首要环节。培养基的成分随着花卉的种类、不同的外植体、不同的培养阶段应当有所不同。一般来说,各种培养基都有大量元素、微量元素、维生素、激素、糖和琼脂等物质,有时还要在培养基里添加有机附加物,如活性炭、香蕉汁、椰子汁等。在生产上,首先选用已有的培养基配方,它是前人研究的成果,又是经过生产实践验证的。现在几乎各种花卉用的营养基配方都有,可以免去您再研究的麻烦,当然在生产实践中,也可适当改进。如果您找不到合适的配方,可先试用MS培养基,MS是Murashige和Skoog的缩写,他们二人于1962年研究出来了这种培养基。下面以MS培养基为例,介绍怎样配制。
(1)配制母液。把培养基中的必需元素按原配方量的50倍、100倍或1 000倍称量后制成一种浓溶液,这种浓溶液叫母液。在配制培养基时按比例分别量取母液稀释到所需的浓度即可。母液配好后贴上标签,放在0~4℃的冰箱中,可使用半年到1年,这样做可节省许多时间。可能产生化学反应的或溶解后产生沉淀的,不能放在同一个容器中。配制母液要用重蒸馏水。药物要使用分析纯或等级较高的化学纯。药物的称量和药液的定容都要准确。
母液①:硫酸镁18.5克,硝酸铵82.5克,硝酸钾95.0克。加水定容到1000毫升,浓度为培养基的50倍,配1升培养基时量取20毫升母液。
母液②:氯化钙22.0克。加水定容到500毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。
母液③:磷酸二氢钾8.5克。加水定容到500毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。
母液④:乙二胺四乙酸二钠3.73克,硫酸亚铁2.78克。加水定容到1000毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。
母液⑤:硼酸620毫克,硫酸锰2230毫克,硫酸锌860毫克,硫酸铜2.5毫克,碘化钾83毫克,钼酸钠25毫克,氯化钴2.5毫克。加水定容到1000毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。
母液⑥:肌醇5克,甘氨酸100毫克,烟酸25毫克,盐酸吡哆醇25毫克,盐酸硫胺素5毫克。加水定容到500毫升,浓度为培养基的100倍,配1升培养基时量取10毫升母液。
(2)配制培养基。配制每1000毫升培养基,称取6~10克琼脂作凝固剂,具体按配方要求称量,放在水浴锅上慢慢溶解。先在量筒内放入一定量的水,按照母液顺序和规定量,量取母液。当母液加完后,根据需要每升培养基再加入生长调节物质如吲哚乙酸或萘乙酸等,细胞分裂素类0.04~10毫克,细胞分裂素应用最多的是6-苄基腺嘌呤,加完后倒入已熔化的琼脂中。每1000毫升培养基加入蔗糖30克或根据要求确定,定容到所需的体积。继续加温,直到琼脂完全熔解。用盐酸或氢氧化钠对培养基的pH进行调节,多数培养基的pH在5.4~6.0之间,MS培养基的pH为5.7。
将配好的培养基趁热倒入培养容器中,培养基占容器体积的1/3~1/4。不要将培养基沾到容器壁上,否则容易被杂菌感染。然后及时加盖,进行高压灭菌,灭菌时要按高压灭菌锅的操作规程使用。在121℃、压力111千帕下维持15~20分钟,温度和时间都要严格控制。到时间后立即切断电源,当高压锅内压力降到常压后,开启放气阀,打开锅盖,取出灭菌好的培养基,放在接种室中培养3天,没被感染后才能用来组织培养。

某些培养基因为其中所含成分的特殊性质(比如不耐热),需要与其他成分分开处理,此时这些特殊成分就要在后期加入,而其他可共同方便处理的成分就可以称之为母液或者基础。
例如配置血琼脂培养基,其中的血液显然就是不能加热的,这时候就先配置好血琼脂基础,冷却到适当程度再加入脱纤维血。

培养基的配制是怎么样的?
答:(2)培养基的配制 首先要根据培养基配方,算好母液吸取量,并按顺序吸取,然后加入蔗糖溶液,并加入蒸馏水定容至所需体积,并用0.1~1摩尔/升的盐酸或氢氧化钠调整pH,加入琼脂加热溶化,配制好的培养基要趁热分注,倒入试管、三角瓶等培养器皿中,一般至容器1/4~1/5左右,最后加塞或封口准备消毒...

培养基中母液的配制有哪几种方法?
答:母液的配制常常有两种方法。一是将培养基的每个组分配成单一化合物母液,一是配成几种不同化合物的混合母液。前者便于配制不同种类的培养基,后者在大量配制同种培养基时省时、省力。以MS培养基配制为例,说明母液配制过程中应注意的问题。该配方中除了蔗糖和琼脂外,还包括有19种成分,其中大多数化合...

组织培养的步骤
答:配制培养基有两种方法可以选择,一是购买培养基中所有化学药品,按照需要自己配制;二是购买商品的混合好的培养基基本成分粉剂,如MS、B5等。自己配制可以节约费用,但浪费时间、人力、且有时由于药品的质量问题,给实验带来麻烦。就目前国内的情况看,大部分还是自己配制。为了方便起见,现以MS培养基为例介绍配置培养基的主要...

举例说明一种培养基的配方和制作过程
答:MS培养基中还需要加入2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、6苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质,并且分别配成母液(01 mg/mL)。其配制方法是:分别称取这3种物质各10 mg,将2,4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶,将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/...

培养基的配制有哪些?
答:(4)Kundson C(KC)培养基 (4)Kundson C(KC)培养基 2.培养基母液的配制和保存 经常配制培养基,为减少工作量及便于低温贮藏,一般配成比所需浓度高10~100倍的母液,配制培养基时只要按比例量取即可。配好的母液需装在棕色小口瓶中,存放在0~4℃冰箱中可使用半年至1年。如发现有沉淀物...

培养基母液配制的方法如何
答:通常我们的实际情况是同一个培养基需要配制多个母液,我们可以将多个微量元素配制在一起,然后在溶液里加几滴浓硫酸,保证母液的稳定性。然后母液应该放在冰箱里4℃冷藏。最好是避光,譬如用棕色瓶分装或外裹一层牛皮纸。使用时则尽量用干净无菌的吸管来移液,或者直接用移液器,枪头一般一次性使用。

怎样利用母液进行MS培养基的配制?
答:先配制4种母液:1)大量元素贮备液,20倍;2)微量元素贮备液,200倍;3)铁盐贮备液,200倍;4)除蔗糖外的有机物贮备液,200倍。配制时将称量出来的各种成分分别放入一个烧杯,先加少量蒸馏水溶解,再依次混合,最后定容;注意铁盐要装入棕色细口瓶。再按每配1L培养基用母液1五十毫升,用母液2-4...

植物组织培养方法的配制方法
答:MS培养基中还需要加入2,4-二氯苯氧乙酸(2,4-D)、萘乙酸(NAA)、6-苄基嘌呤(6BA)等植物生长调节物质,并且分别配成母液(0.1 mg/mL)。其配制方法是:分别称取这3种物质各10 mg,将2,4-D和NAA用少量(1 mL)无水乙醇预溶,将6BA用少量(1 mL)的物质的量浓度为0.1 mol/L的NaOH...

急!植物组织培养的母液计算。
答:对于2000ml的培养基应该是这样配制的:所谓1/2MS,指的是大量元素母液,正常的我们应该加入2000除以20即100ml的体积,因为是1/2MS,所以只需要加入50ml;微量元素母液加入:2000/100=20ml;铁盐母液2000/100=20ml;有机物母液2000/100=20ml;6BA加入4ml,就是4mg,NAA是0.2ml.蔗糖就是2000乘以3.0 %...

配制培养基的步骤?
答:配制固体培养基时,先将上述已配好的液体培养基煮沸,再将称好的琼脂加入,继续加热至完全融化。并不断搅拌,以免琼脂糊底烧焦。2、调节pH值 用pH试纸(或pH电位计、氢离子浓度比色计)测试培养基的pH值,如不符合需要,可用10%HCl或10%NaOH进行调节,直到调节到配方要求的pH值为止。3、过滤...