农杆菌的转化流程
1. 农杆菌的培养及感受态的制备
① 农杆菌菌株划YM平板，26-28℃培养48 h；
② 挑取单菌落接种到40 ml 无抗生素的YM液体培养基中，250 r/min， 26-28℃悬浮培养12-16 h；
③ 将菌液转入灭过菌的50 ml离心管中，4℃，8000 r/min,离心8 min；
④ 弃上清，加入用100 mM NaCl (4℃预冷)重悬收集的农杆菌；
⑤ 4℃，8000 r/min, 离心8 min；
⑥ 弃上清，加入原始菌液1/50体积（800 l/管（此时的感受态农杆菌可以直接用于转化）并分装成100 l）的20 mM CaCl2重悬菌体；
⑦ 置液氮中10 s，放入-20℃冰箱中保存备用。
2.农杆菌的转化（冻融法）
将感受态农杆菌置于冰上，加入1g质粒DNA（体积不宜超过10 l），充分混匀，冰上放置30 min；
② 置液氮中快速冷却约1min后迅速转入37℃水浴中，待其融化；
③ 加1 ml 无抗生素的YM 液体培养基于28℃，230 r/min 培养2-4 h；（或直接用1 mll，留500 l于管中④ 3000 r/min 离心2 min收集菌体，将上清吸去500 培养菌直接涂布含抗生素的YM平板）；
⑤ 重悬菌体并涂布到含有适当抗生素的YM平板上吹干, 28℃培养48 h；
⑥ 挑取单菌落接种到筛选液体YM培养基中，28℃，250 r/min 培养48 h，将菌液用于保存或转化；
注：EHA105抗利福平霉素，LBA4404抗硫酸链霉素。在转化前后的所有培养基中均可加入相应的这两种抗生素，以防止杂菌污染。以上挑菌及抗生素加入工作均在超净台上进行。
注明：本方法整理自protocol网站，仅做分享。
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农杆菌转化法的过程
答：农杆菌转化法的过程如下：转化:目的基因插入Ti质粒的T-DNA上--进入农杆菌--导入植物细胞--目的基因整合到植物染色体的DNA上--目的基因得以稳定维持和表达。1、获取目的基因:用限制性核酸内切酶切割下目的基因。2、基因表达载体的构建:将目的基因与载体(大多数选用质粒)用DNA连接酶连接起来。3、将目的基因...
农杆菌转化的具体步骤是什么?
答：转化前一天将需要做转化的野生型拟南芥苗子浇水浇透。于中午12点接菌于有YEP培养液的试管中10ul：10ml接种。28℃，3000rpm摇过夜，约30小时，次日下午6点将已摇活的菌按（1：400）及750ul菌液转至汉300毫升YEP+K50+Rif中培养28℃，300rpm约14小时，次日上午8点测OD值，用YEP+Rif作为空白对照，当...
高中生物农杆菌转化法
答：连接到植物的DNA上了，所以说可以随着减数分裂进入花粉，传递给后代。侵染的就是普通体细胞。
农杆菌转化实验步骤
答：4．植株转化实验：农杆菌与植物细胞的共培养，在溶液中加入促进植株愈伤生长的激素能一定程度提高转化率。转化细胞的筛选，大多是利用抗生素进行筛选的，抗生素的选择则需根据目的载体确定。同时进行利用抗生素完成脱菌的过程。也有的资料提供的是感染植株，也就是农杆菌直接去感染植物。5．最后将成功表达的细...
农杆菌转化法详细过程
答：农杆菌转化法详细过程如下：1、获得目的基因：用限制性内切酶切割目的基因。基因工程示意图。2、基因表达载体的构建：目的基因与载体（多为质粒）通过DNA连接酶连接。3、将目的基因导入受体细胞：将含有目的基因的重组质粒导入根癌农杆菌（根癌农杆菌为受体细胞）。4、目的基因的检测和鉴定：DNA分子杂交/...
大肠杆菌的转化原理及方法
答：6. 在超净工作台中取上述转化混合液100-300 μl，分别滴到含合适抗菌素的固体LB平板培养皿中，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。7. 如果载体和宿主菌适合蓝白斑筛选的话，滴完菌液后再在平板上滴加40 μl 2% X-gal，8 μl 20% IPTG，用酒精灯烧过的玻璃涂布棒涂布均匀。8. 在涂好...
农杆菌转化法的步骤
答：1、农杆菌培养至适当浓度。2、受体材料消毒处理并切成适当大小组织块。3、组织块浸泡于菌液中适当的时间。4、浸泡过的组织块放于共培养基上培养。5、组织块转移到筛选培养基上培养，选出阳性幼苗。检测方法根据实验目的不同而不同。可以用PCR扩增目的片段；如果有报告基因GUS、GFP等也可以进行染色或荧光...
农杆菌的转化流程
答：③ 将菌液转入灭过菌的50 ml离心管中，4℃，8000 r/min,离心8 min；④ 弃上清，加入用100 mM NaCl (4℃预冷)重悬收集的农杆菌；⑤ 4℃，8000 r/min, 离心8 min；⑥ 弃上清，加入原始菌液1/50体积（800 l/管（此时的感受态农杆菌可以直接用于转化）并分装成100 l）的20 mM CaCl2重悬菌...
大肠杆菌是怎样转化的?
答：其实感受态菌先低温的作用是让DNA-CaCl2复合体粘着在菌体表面，短暂热激的作用是让菌壁通透性改变，再经过2min左右冰上静置，附着在表面上的DNA就进入菌体了。以上就是大肠杆菌的转化过程。大肠杆菌的简介 人和动物肠道中最常见的一种细菌，主要寄生于大肠内，约占肠道菌中的1%。是一种两端钝圆、能运动...
如何进行大肠杆菌的转化实验?
答：取100-300 μl转化混合液，均匀滴到含抗菌素的LB平板上，用酒精灯消毒过的涂布棒涂抹。 如果进行蓝白斑筛选，滴完菌液后在平板上加40 μl 2% X-gal和8 μl 20% IPTG，再次涂抹。 标记培养皿后，先在37℃培养30-60分钟待液体渗透，再倒置培养过夜。 实验结束后，清洁工作区域并记录实验报...
