考马斯亮蓝发测蛋白质含量时蛋白质变性后跟考马斯亮蓝反应有影响吗? 蛋白质溶液含有什么物质时不能用考马斯亮蓝法测蛋白质含量
若是变形后还能搅为均匀的分散在溶液中，影响相对较小
若是沉淀在光度计下不易透射，影响较大
考马斯亮蓝G-250法测定蛋白质含量的原理是什么?~
在酸性条件下，考马斯亮兰G-250染料与蛋白质疏水区结合，导致最大吸收峰由465 nm 变为595 nm，同时颜色也由棕色变为蓝色,该蓝色化合物颜色的深浅与蛋白质浓度的高低成正比关系。将蛋白质样品或稀释的BSA 与Bradford试剂混合，测量在595 nm处的吸收值，在建立由一系列稀释的BSA建立的标准曲线的情况下，蛋白质的浓度可以根据标准曲线而确定。
考马斯亮蓝G-250（Coomassie brilliant blue G-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；其结合物在室温下1h内保持稳定。
该法是1976年Bradford建立，试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1 000μg/mL，最小可测2.5μg/mL蛋白质，是一种常用的微量蛋白质快速测定方法。
考马斯亮蓝有G250和R250两种。其中考马斯亮蓝G250由于与蛋白质的结合反应十分迅速，常用来作为蛋白质含量的测定。考马斯亮蓝R250与蛋白质反应虽然比较缓慢，但是可以被洗脱下去，所以可以用来对电泳条带染色。
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量流程：
该方法用于大多数蛋白质的定量是比较精确的，但不适用于小分子碱性多肽的定量。如核糖核酸酶或溶菌酶。去污剂的浓度超过0．2%影响测定结果。如TritonX-100、SDS、NP-40等。
1．Bradford浓染液的配制：将100mg考马斯亮蓝G-250溶于50ml 95%乙醇，加入100ml85%的磷酸，然后，用蒸馏水补充至1000ml，此染液放4℃至少6个月保持稳定。
2．标准曲线蛋白质样本的准备：尽量使用与待测样本性质相近的蛋白质作为标准品，例如测定抗体，可用纯化的抗体作为标准。如果待测样本是未知的，也可用抗体作为标准蛋白。通常在20ug—150ug/100ul之间绘制标准曲线。
3．将待测样本溶于缓冲溶液中，该缓冲溶液应与制作标准曲线的缓冲溶液相同(最好用PBS)。
4．按1：5用蒸馏水稀释浓染料结合溶液，如出现沉淀，过滤除去。
5．每个样本加5ml稀释的染料结合溶液，作用5～30min。染液与蛋白质结合后，将由红色变为蓝色，在595nm波长下测定其吸光度。注意，显色反应不得超过30min．
6．根据标准曲线计算待测样本的浓度。
考马斯亮蓝法测定蛋白质含量实验中，使用的水最低要求是蒸馏水，更高精度要求可能会使用双蒸水。
因为Bradford检测中要用的试剂配制，标准曲线的制作都要用到水。
考马斯亮蓝测定蛋白质的原理是什么
答：需要注意的是，不同蛋白质与考马斯亮蓝G-250的结合能力可能存在差异，因此在制作标准曲线时，通常选择与待测样品性质相近的蛋白质作为标准品，以减少测定偏差。综上所述，考马斯亮蓝测定蛋白质的原理是基于蛋白质与考马斯亮蓝G-250染料的结合反应，通过测定光吸收值来定量测定蛋白质的含量。这种方法操作...
双氧水使蛋白质变性后,加考马斯亮蓝测样品中蛋白含量会不会有影响_百度...
答：有影响 考马斯亮蓝测定蛋白质的原理：考马斯亮蓝G-250测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝G-250在游离态下呈红色，当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色，前者最大光吸收在465nm，后者在595nm。在一定蛋白质浓度范围内（0～100μg/ml），蛋白质－色素结合物在595nm波长下的光吸收与...
紫外分光光度法和考马斯亮蓝法得出的待测蛋白质含量呈现怎样的差异...
答：适用范围差异：紫外分光光度法适用于大多数蛋白质的测定，特别适用于测定含有共轭双键氨基酸残基丰富的蛋白质，如胶原蛋白、角蛋白等。而考马斯亮蓝法则更适用于快速测定微量蛋白质，尤其在样品中干扰物质较多时，如生物体液、组织等复杂样品。综上所述，紫外分光光度法和考马斯亮蓝法得出的待测蛋白质含量...
savag法除蛋白质后,怎么检测样品中蛋白质的含量?
答：0.5mg牛血清蛋白/ml溶液的A595约为0.50。2. 微量法 当样品中蛋白质浓度较稀时（10－100mg/ml）,可将取样量（包括补加的水）加大到0.5ml或1.0ml, 空白对照则分别为0.5ml或1.0ml H2O, 考马斯亮蓝G－250试剂仍加5.0ml, 同时作相应的标准曲线，测定595nm的光吸收值。0.05mg牛血清蛋白/...
标准蛋白质样品能否用考马斯亮蓝法测定?为什么?
答：的1种测定微量蛋白质的方法l5]，考马斯亮蓝所含疏 水基团在酸性条件下与蛋白质的疏水微区具有亲和力，通过疏水作用与蛋白质相结合，形成的蓝色蛋白质一染料复合物，在595 nm处有最大吸光度，复合物1 h内保持稳定。在一定的蛋白质浓度范围内，蛋白质一染料复合物在595nm处的吸光度与蛋白质含量成正比...
考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方法有什么优点?
答：考马斯亮蓝G250法测蛋白质含量比其他方法的优点是：1.蛋白质与考马斯亮蓝G-250结合在2min左右的时间内达到平衡，完成反应十分迅速；2.其结合物在室温下1h内保持稳定。3.该法试剂配制简单，操作简便快捷，反应非常灵敏，灵敏度比Lowry法还高4倍，可测定微克级蛋白质含量，测定蛋白质浓度范围为0～1,...
植物细胞骨架观察中考马斯亮蓝有什么用
答：考马斯亮蓝g-250（coomassie brilliant blue g-250）测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。考马斯亮蓝g-250在游离状态下呈红色，最大光吸收在488nm；当它与蛋白质结合后变为青色，蛋白质-色素结合物在595nm波长下有最大光吸收。其光吸收值与蛋白质含量成正比，因此可用于蛋白质的定量测定。蛋白质与...
测定蛋白质含量的方法
答：测定蛋白质含量的方法有：碱性染料法、双缩脲法、紫外分光光度法、考马斯亮蓝法。1、碱性染料法 此法利用的是带苯环的氨基酸在碱性溶液中以偶氮染料显色，然后测定溶液中的吸光度，再与标准曲线对比，从而确定蛋白质的含量。2、双缩脲法 双缩脲法是一种用于测定蛋白质含量的经典方法。在碱性条件下，...
求助考马斯亮蓝法测蛋白质的浓度
答：常用紫外分光光度法测定蛋白质含量。以下引用：6种方法测定蛋白质含量 一、微量凯氏（kjeldahl）定氮法 样品与浓硫酸共热。含氮有机物即分解产生氨（消化），氨又与硫酸作用，变成硫酸氨。经强碱碱化使之分解放出氨，借蒸汽将氨蒸至酸液中，根据此酸液被中和的程度可计算得样品之氮含量。若以甘氨酸...
考马斯亮蓝G250法测定蛋白质含量时,如何避免测定中出现误差,避免样品...
答：考马斯亮蓝测定蛋白质浓度是较常用的方法，误差可尽量减到最小，需注意：测定OD值前，将分光光度计提前预热至少30分钟，可保证准确性；配制好的考马斯亮蓝溶液应放于4度保存备用；盐离子不会影响实验结果，但去污剂，如TRITON X-100，SDS等，会严重干扰实验结果。
