黑木耳二级种（原种）三级种（栽培种）菌种培养基如何配制？ 二级种和三级种培养基如何制作？
（1）培养基配方
①干杂木屑78%，麦麸或米糠20%，蔗糖1%，碳酸钙或熟石膏粉1%，含水量60%，pH自然。
②可部分或全部以棉籽壳替代杂木屑，配方相同。
③除木屑外，也可用枝条来生产栽培种。其配方：枝条100千克，蔗糖0.6千克，木屑18千克，石膏0.6千克，麦麸10.8千克，清水50千克。
（2）二级种和三级种培养基制作
黑木耳二级种（原种）、三级种（栽培种）制作与黑木耳相似，通常是采用杂木屑（或棉籽壳或杂木枝条）麸皮培养基，二级种以750毫升菌种瓶为容器。三级种以菌瓶或菌袋为容器。为确保菌种生长发育良好，在培养基选料和配制上必须把握好以下各点：
①拌料。把干木屑，同麦麸或米糠、石膏粉或碳酸钙先搅拌均匀；把蔗糖溶于水中后，浇混于料中，按每100千克干料加入清水120千克左右，反复搅拌均匀，至含水量60%左右，即手握能成团，落地即散为度，过筛，将结团打散。
②装瓶（袋）。把配制好的培养料装入750毫升的菌种瓶中，料装至瓶肩，后压实，表面按平，装料后将瓶内外壁和瓶口擦净，塞棉塞。菌种袋常用15厘米×30厘米规格柱形袋，袋口有套环和棉塞，二级种菌瓶（袋）内中心不打穴，三级种中心可打穴。
③灭菌。二级种应采用高压灭菌，以0.152兆帕压力保持1.5～2小时。蒸汽的温度和蒸汽压力关系见表13。栽培种料高压、常压灭菌均可，常压灭菌旺火升温到100℃，保持8～10小时。
表13 蒸汽压力与温度的关系
黑木耳一级种（母种）菌种培养基如何配制？~
（1）培养基常用配方
PDA培养基：马铃薯（或玉米粉或麦麸）100克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000毫升，pH为6.5。
（2）一级种培养基制作
①将马铃薯洗净去皮（已发芽的要挖掉芽眼），称量取200克切成薄片，置于铝锅加水煮沸30分钟，用4层纱布过滤取汁，补足1000毫升容量；称取琼脂20克，用剪刀剪碎后加入马铃薯汁液内，微火加热，不时搅拌直至琼脂全部溶化，加入葡萄糖，稍煮几分钟后，用4层湿纱布过滤，其液汁装入试管。
②趁热分装入管，装量为试管长度的1/5，塞紧棉塞，立放于试管笼上。分装时应注意不使培养基粘附在试管口上，以免杂菌感染。
③及时高压灭菌，灭菌时将试管每10支扎成一捆，棉塞一端用牛皮纸包好，垂直放入高压锅内进行蒸汽灭菌，当压力达0.05兆帕时，微开排气阀，使压力降至“0”，重新加热灭菌，在0.110兆帕的压力下保持30分钟，待压力表自动降到“0”时，再打开锅盖，取出试管趁热排斜面。
④试管取出后趁热将试管口一端垫高，斜靠在桌上的小木棒上，使管内培养液斜面上长度达4/5，试管上面覆盖毛巾，冷却后即成斜面固体培养基。
⑤灭菌后置常温下48小时，未发现有杂菌产生，即可作为一级种斜面培养基用于接种，一级种培养的适宜温度为22～28℃，大约经10～15天菌丝可长满斜面。琼脂斜面培养基配制工艺流程如图9所示。
图9 琼脂培养基配制工艺流程
1.分装试管 2.管口塞棉 3.包扎成捆 4.高压灭菌 5.摆成斜面
银耳二级种和三级种是采用木屑固体培养基。为确保菌种生长发育良好，在培养基选料和配制上必须把握好以下5点：
（1）精选原料
选用适合银耳菌丝生长的树种。食用菌制种专业户实践表明，山乌桕、盐肤木、油桐、米槠、野漆、黄连木、杧果、栓皮栎、白蜡树等较为理想。加工成木屑不宜太粗，一般以麦麸、米糠状细度为好。此外甘蔗渣也可利用。
（2）合理配方
现有银耳原种和栽培种的培养基配方有以下3种：
配方之一：木屑67%，麦麸30%，蔗糖1.5%，石膏粉1.5%。
配方之二：木屑70%，麦麸25%，蔗糖3%，石膏粉1.5%，硫酸镁0.5%。
配方之三：甘蔗渣72%，米糠24%，黄豆粉3%，碳酸钙1%。
银耳菌种需要含氮量高的培养料，因此麦麸用量比其他菇类菌种多，但在气温高的季节配制时适当少些；蔗糖用量视木屑材质好坏及季节适当调节。
（3）拌料均匀
把晒干的适生树木屑，同麦麸或米糠、石膏粉先搅拌均匀；把蔗糖和硫酸镁置于水中溶化后，混合于料中，然后反复搅拌均匀，过筛，将结团打散。
（4）水分达标
每100千克干料加入清水130千克左右，含水量60%～63%。拌匀待水分渗透料心时进行检测，通常以手握紧培养料能成团不松散，指间有水溢出一滴，即为适合的含水量。如果有水珠成串下滴，为含水量过多；若无水痕渗出，则含水量不够。在气温高的季节里制种时，若有空调设备，培养基的含水量也应稍多一些，培养基的pH为5～6。
（5）装料适量
把调制好的培养料装入750克的玻璃菌种瓶中，压实，表面按平。银耳菌种装料量与众不同，二级种装料占2/3瓶量，三级种只装1/2瓶量。装料后将菌瓶内外壁和瓶口擦净，塞棉塞，及时灭菌。
（6）灭菌彻底
培养基常压灭菌灭菌仓升温到100℃，保持10～13小时，再利用灶内余火焖2小时。灭菌达标后，去盖让水蒸气散发，并利用锅内余温将瓶口棉塞烤干，冷却4～6小时。高压灭菌，0.152兆帕压力保持1.5～2小时。高压蒸汽灭菌的温度和蒸汽压力的关系见表6。
表6 蒸汽压力与温度的关系
