荧光定量PCR（一）— 基础介绍
作者&投稿：畅素 （若有异议请与网页底部的电邮联系）
当有入射光照射物质时，其分子会吸收入射光的能量从而受到激发使得其电子由低能级跃迁至高能级，此时处于激发态的分子其结构并不稳定，会通过跃迁而失去能量返回基态，这个过程会伴随着荧光或者磷光的产生。如图所示
所有荧光物质都具有两个特征光谱，也即激发和发射光谱。
通常情况下，物质的发射光波长总是大于其激发光波长，这是因为，物质在收到激发的过程中，存在着一定的能量损失。激发和发射光波长的差值称之为斯托克位移。
荧光物质分子与溶剂或溶质分子之间所发生的导致荧光强度下降的物理或者化学作用过程
荧光淬灭的形式很多，机理也比较复杂。主要有如下几种类型
荧光定量PCR技术是为了测定样本中特异的PCR片段相对及绝对量，是一种测定特异的PCR片段含量的方式。如测定病人样本中病原体的含量、实验样本中某一特定的mRNA的含量等。为了达到高效反应，应将实时PCR应用的引物设计为能生成短的扩增子。常用的方法有SYBR Green的荧光染料法和TaqMan探针法，两种方法的特点及应用如下表：
由于目前不同荧光定量PCR仪的原理和提供的检测光光谱范围的差异，因此在选择探针的发光基团和淬灭基团时一定要根据所用的仪器型号设置的可检测的荧光信号范围内选择（探针法可连接我们的荧光定量PCR试剂盒的编号及对应的机器型号）
由淬灭基团TAMRA、Eclipse或BHQ系列染料组成的双标记荧光探针常常被用作水解探针(Hydrolysis Probes)，或称"TaqMan"探针，用于Real Time PCR实验。由于这些淬灭染料的光谱学性质不同(见下图)，作为淬灭基团使用时的特点也不同，现说明如下：
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所有荧光物质都具有两个特征光谱，也即激发和发射光谱。
通常情况下，物质的发射光波长总是大于其激发光波长，这是因为，物质在收到激发的过程中，存在着一定的能量损失。激发和发射光波长的差值称之为斯托克位移。
荧光物质分子与溶剂或溶质分子之间所发生的导致荧光强度下降的物理或者化学作用过程
荧光淬灭的形式很多，机理也比较复杂。主要有如下几种类型
荧光定量PCR技术是为了测定样本中特异的PCR片段相对及绝对量，是一种测定特异的PCR片段含量的方式。如测定病人样本中病原体的含量、实验样本中某一特定的mRNA的含量等。为了达到高效反应，应将实时PCR应用的引物设计为能生成短的扩增子。常用的方法有SYBR Green的荧光染料法和TaqMan探针法，两种方法的特点及应用如下表：
由于目前不同荧光定量PCR仪的原理和提供的检测光光谱范围的差异，因此在选择探针的发光基团和淬灭基团时一定要根据所用的仪器型号设置的可检测的荧光信号范围内选择（探针法可连接我们的荧光定量PCR试剂盒的编号及对应的机器型号）
由淬灭基团TAMRA、Eclipse或BHQ系列染料组成的双标记荧光探针常常被用作水解探针(Hydrolysis Probes)，或称"TaqMan"探针，用于Real Time PCR实验。由于这些淬灭染料的光谱学性质不同(见下图)，作为淬灭基团使用时的特点也不同，现说明如下：
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