大肠菌群检测方法 食品中的大肠杆菌的检测方法
GB 4789.3-2016 《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》中的规定操作步骤：
1、乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。
2、分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。
3、证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。
SN0169-92 《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法》规定操作：
1、推测试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST肉汤。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。
2、证实试验：将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中，36±1℃培养48±2h，观察是否产气。以BGLB产气为阳性。查MPN表，报告每ml(g)样品中大肠菌群的MPN值。
扩展资料：
大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。
粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在，因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。
参考资料来源：百度百科-大肠菌群
1、国家标准：
国家标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。
乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。
分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。
证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。
报告：根据证实为大肠杆菌阳性的管数，查MPN表，报告每1ml（g）大肠菌群的MPN值。具体操作参见
GB4789.3-2010《中华人民共和国国家标准食品卫生微生物学检验 大肠菌群测定》
2、现行有效新国标：
原国家商检局制订的行业标准，等效采用美国FDA的标准方法，用于对出口食品中的大肠杆菌进行检测。本方法采用两步法：
推测试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST肉汤。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。
证实试验：将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中，36±1℃培养48±2h，观察是否产气。以BGLB产气为阳性。查MPN表，报告每ml(g)样品中大肠菌群的MPN值。
扩展资料
大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌。
这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为：需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胚杆菌。
一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠菌群主要包括畅杆菌科中韵埃希氏菌属、柠檬酸杆菌属、魔雷伯氏菌属和肠杆菌属。这些属的细菌均来自于人和温血动物的肠道，需氧与兼性厌氧，不形成芽孢。
在35～37℃条件下，48 小时内能发酵乳糖声酸产气，革兰氏阴性。大肠菌群中以埃希氏菌属为主，埃希氏菌属教俗称为典型大肠杆菌。
大肠菌群都是直接或间接地来自人和温血动物的粪便。本群中典型大肠杆菌以外的菌属，除直接来自粪便外，也可能来自典型大肠杆菌排出体外7～30 天后在环境中的变异。
所以食品中检出大肠菌群J表示食品受动人寝温血动物的粪便污染，其中典型大肠杆菌为粪便近期污染，其他菌属则可能为粪便的陈旧污染。
参考资料：百度百科-大肠杆菌
进入无菌室步骤：
1，进入无菌室前应打开紫光灯进行灭菌，时间为0。5—1小时。
2，关灯后0•5小时后放可进入。
3，进入更衣间更换衣服，佩带口罩、帽子、鞋套
实验步骤：
1， 进入无菌室后，先把酒精灯点燃，然后在用酒精棉进行手部消毒。（酒精棉是用75%的酒精加入脱脂棉中制成）
2， 准备双料管3根，单料管6根，培养皿7个。
3， 直接从原液中吸取10ml放入双料管，（3根每根各10ml）
4， 再吸取原液1ml放入单料管中（3根每根各1ml）
5， 再吸取原液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）
6， 再吸取原液1ml放入盐水管中制成－1梯度的样液
7， 更换一根吸管，从－1梯度的样液吸取1ml样液放入单料管中（3根每根各1ml）
8， 再吸取－1梯度样液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）
9， 再把每个培养皿中到入营养琼脂平铺底部摇允（注另作3个培养皿：空气空白，把培养皿打开十分钟倒入营养琼脂平铺底部摇匀。琼脂空白，把培养皿中倒入营养琼脂平铺底部摇匀。盐水空白，吸1ml生理盐水放入培养皿中，倒入营养琼脂平铺底部摇匀。）
10， 把全部作好的放入培养箱中，温度36C＋－1×C，大肠24H＋－2H，菌落48H＋－2H，（待培养皿中的琼脂凝固后反转过来放入培养箱中）
11， 梯度：－1梯度为1ml原液加入9ml生理盐水配成
－2梯度为1ml－1梯度样液加入9ml生理盐水配成
－3梯度－4梯度配制方法和－1、－2梯度的配制方法一样
12， 如果大肠初发酵产生气泡，用接种笔沾一个产气的液在伊红美兰平板上画之字形然后放入培养箱中36C，24H＋－2H 。（接种笔在每次使用前必须在酒精灯上消毒。所画之形不能划破伊红美兰琼脂表面）
13， 取出后在用接种笔在伊红美兰平板之字形上挑菌，放入乳糖复发酵管中 ，然后再培养36C＋－1C，24H＋＋－2H。
14， 再在伊红美兰平板之字形上挑菌，放到载玻片上作镜检。（方法见标准）
15， 只有镜检成紫红色和乳糖复发酵管产气同时成立的情况下，才能断定这根管是不合格。
16， 清洗消毒这根试管前必须进行消毒霉菌，121C，0。5小时同时不能放气。
拓展资料：
大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致，其定义为:需氧及兼性厌氧、在37℃能分解乳糖产酸产气的革兰氏阴性无芽胚杆菌。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷伯氏菌和阴沟肠杆菌等。
进入无菌室步骤
1． 进入无菌室前应打开紫光灯进行灭菌，时间为0。5—1小时。
2． 关灯后0•5小时后放可进入。
3． 进入更衣间更换衣服，佩带口罩、帽子、鞋套
实验步骤
1， 进入无菌室后，先把酒精灯点燃，然后在用酒精棉进行手部消毒。（酒精棉是用75%的酒精加入脱脂棉中制成）
2， 准备双料管3根，单料管6根，培养皿7个。
3， 直接从原液中吸取10ml放入双料管，（3根每根各10ml）
4， 再吸取原液1ml放入单料管中（3根每根各1ml）
5， 再吸取原液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）
6， 再吸取原液1ml放入盐水管中制成－1梯度的样液
7， 更换一根吸管，从－1梯度的样液吸取1ml样液放入单料管中（3根每根各1ml）
8， 再吸取－1梯度样液1ml放入培养皿中（2个培养皿各1ml）
9， 再把每个培养皿中到入营养琼脂平铺底部摇允（注另作3个培养皿：空气空白，把培养皿打开十分钟倒入营养琼脂平铺底部摇匀。琼脂空白，把培养皿中倒入营养琼脂平铺底部摇匀。盐水空白，吸1ml生理盐水放入培养皿中，倒入营养琼脂平铺底部摇匀。）
10， 把全部作好的放入培养箱中，温度36C＋－1×C，大肠24H＋－2H，菌落48H＋－2H，（待培养皿中的琼脂凝固后反转过来放入培养箱中）
11， 梯度：－1梯度为1ml原液加入9ml生理盐水配成
－2梯度为1ml－1梯度样液加入9ml生理盐水配成
－3梯度－4梯度配制方法和－1、－2梯度的配制方法一样
12， 如果大肠初发酵产生气泡，用接种笔沾一个产气的液在伊红美兰平板上画之字形然后放入培养箱中36C，24H＋－2H 。（接种笔在每次使用前必须在酒精灯上消毒。所画之形不能划破伊红美兰琼脂表面）
13， 取出后在用接种笔在伊红美兰平板之字形上挑菌，放入乳糖复发酵管中 ，然后再培养36C＋－1C，24H＋＋－2H。
14， 再在伊红美兰平板之字形上挑菌，放到载玻片上作镜检。（方法见标准）
15， 只有镜检成紫红色和乳糖复发酵管产气同时成立的情况下，才能断定这根管是不合格。
16， 清洗消毒这根试管前必须进行消毒霉菌，121C，0。5小时同时不能放气。
GB4789.3-2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠菌群计数》中的规定操作步骤：
1、乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。
2、分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培养18-24h，观察菌落形态。
3、证实试验：挑取平板上的可疑菌落，进行革兰氏染色观察。同时接种乳糖发酵管36±1℃培养24±2h，观察产气情况。
SN0169-92《中华人民共和国进出口商品检验行业标准出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌检验方法》规定操作：
1、推测试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管LST肉汤。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。
2、证实试验：将产气管培养物接种煌绿乳糖胆盐（BGLB）肉汤管中，36±1℃培养48±2h，观察是否产气。以BGLB产气为阳性。查MPN表，报告每ml(g)样品中大肠菌群的MPN值。
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扩展资料：
大肠菌群并非细菌学分类命名，而是卫生细菌领域的用语，它不代表某一个或某一属细菌，而指的是具有某些特性的一组与粪便污染有关的细菌，这些细菌在生化及血清学方面并非完全一致。一般认为该菌群细菌可包括大肠埃希氏菌、柠檬酸杆菌、产气克雷白氏菌和阴沟肠杆菌等。
大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。
粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除一般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在，因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。
参考资料来源：/baike.baidu.com/item/%E5%A4%A7%E8%82%A0%E8%8F%8C%E7%BE%A4/7324866?fr=aladdin#4"target="_blank"title="只支持选中一个链接时生效">百度百科-大肠菌群
大肠杆菌的检测方法~
多管发酵法。
多管发酵法是一种检测水体中大肠杆菌的传统方法，这种方法是在44.5℃的含有荧光底物的培养基上连续培养24h，而后能产生分解荧光底物——葡萄糖醛酸酶，从而释放出荧光产物，进而使培养基在紫外光照射下产生特征荧光。此方法可被用来对原样品中的菌落数作统计学估计。
在单料或双料乳糖胆盐发酵管内发酵，分离培养试验，利用伊红美蓝培养皿分离，接着是在乳糖发酵管中进行二次发酵，最后通过芽孢染色、革兰氏染色、显微镜观察等来完成。多管发酵法对试验条件要求不高，成本低，但是检测时间较长，容易受其他条件干扰，进而影响到测定结果的精确度。
扩展资料：
注意事项：
1、检样时注意无菌操作。
2、稀释时采用的稀释液可以用磷酸盐缓冲液或生理盐水，接种时可采用九管法，设置三个梯度，分别为0.1g/mL、0.01g/mL、0.001g/mL，每一个稀释度的试管应充分混匀。
3、每次实验需要有阴性对照。
4、使用小倒管培养基配制时，为排净气泡，灭菌时不要把试管的盖子盖的太紧，灭菌后注意观察一下倒管中的气体是否排完全、
5、高压灭菌后等高压灭菌锅的压力表达到0，取出培养基放到冰箱冷却，效果会比较好。
参考资料来源：百度百科-大肠杆菌测试片
参考资料来源：百度百科-大肠杆菌
一、细菌的分离鉴定
1、标本：肠道外感染取中段尿、血液、脓液、脑脊液等，腹泻者取粪便。
2、分离培养与鉴定：粪便标本直接接种肠道杆菌选择性培养基。血液需先经肉汤增菌，再转种血琼脂平板。其他标本可同时接种血琼脂平板和肠道杆菌选择性培养基。
37℃孵育18～24小时后，观察菌落并涂片染色镜检。采用一系列生化反应进行鉴定。肠致病性大肠杆菌须先作血清学定型试验。必要时检定肠霉毒素。
泌尿系统除确定大肠杆菌外，还应计数，每毫升尿含菌量≥100，000时，才有诊断价值。
二、卫生细菌学检查
大肠杆菌不断随粪便排出体外，污染周围环境和水源、食品等。取样检查时，样品中大肠杆菌越多，表示样品被粪便污染越严重，也表明样品中存在肠道致病菌的可能性越大。故应对饮水、食品、饮料进行卫生细菌学检查。
1、细菌总数：检测每毫升或每克样品中所含细菌数，采用倾注培养计算。中国规定的卫生标准是每毫升饮水中细菌总数不得超过100个。
2、大肠菌数指数：指每立升中大肠菌群数，采用乳糖发酵法检测。中国的卫生标准是每1000ml饮水中不得超过3个大肠菌群；瓶装汽水、果汁等每100ml大肠菌群不得超过5个。
三、全自动微生物定量分析仪（TEMPO）检测
全自动微生物定量分析（TEMPO）仪的大肠杆菌群计数检测有TC和CC两种方法。TEMPOTC的开发是为了获得NFISO4832标准相当性能水平。
TEMPOCC法是TEMPO仪器上根据BAM方法专门用于24h计数食品中大肠杆菌群的方法。该法是为了获得和AOAC官方方法966.24及美国公共健康联合会检测乳制品检测方发（SMEDP）一致的效果。TEMPO系统根据阳性空的大小和数目来推算出原始样本中大肠杆菌群数目。
/iknow-pic.cdn.bcebos.com/9922720e0cf3d7caaee9549ffc1fbe096b63a938"target="_blank"title="点击查看大图"class="ikqb_img_alink">/iknow-pic.cdn.bcebos.com/9922720e0cf3d7caaee9549ffc1fbe096b63a938?x-bce-process=image%2Fresize%2Cm_lfit%2Cw_600%2Ch_800%2Climit_1%2Fquality%2Cq_85%2Fformat%2Cf_auto"esrc="https://iknow-pic.cdn.bcebos.com/9922720e0cf3d7caaee9549ffc1fbe096b63a938"/>
扩展资料：
多管发酵法是一种检测水体中大肠杆菌的传统方法，这种方法是在44.5℃的含有荧光底物的培养基上连续培养24h，而后能产生分解荧光底物——葡萄糖醛酸酶，从而释放出荧光产物，进而使培养基在紫外光照射下产生特征荧光。
此方法可被用来对原样品中的菌落数作统计学估计。
一般涉及以下试验：首先是发酵，在单料或双料乳糖胆盐发酵管内发酵；然后是分离培养试验，利用伊红美蓝培养皿分离；接着是在乳糖发酵管中进行二次发酵，最后通过芽孢染色、革兰氏染色、显微镜观察等来完成。
多管发酵法对试验条件要求不高，成本低，但是检测时间较长，容易受其他条件干扰，进而影响到测定结果的精确度。
参考资料来源：/baike.baidu.com/item/%E5%A4%A7%E8%82%A0%E6%9D%86%E8%8F%8C/556836?fr=aladdin#3"target="_blank"title="百度百科-大肠杆菌">百度百科-大肠杆菌
大肠菌群检验程序+报告
答：大肠菌群是指一群能发酵乳糖、产酸(培养基原来的颜色是红色的，如果产酸会变成黄色)、产气、需氧和兼性厌氧的革兰氏阴性无芽胞杆菌。食品检出大肠菌群，则表示该食品曾受粪便污染。结果报告为每100ml（g）样品中大肠菌群的最近似数（MPN）设备和材料：1. 温箱：36±1度 2. 冰箱：0-4度 3....
大肠菌群测定方法
答：两个标准方法在检测程序上略有不同。（一）国家标准：国家标准采用三步法，即：乳糖发酵试验、分离培养和证实试验。乳糖发酵试验：样品稀释后，选择三个稀释度，每个稀释度接种三管乳糖胆盐发酵管。36±1℃培养48±2h，观察是否产气。分离培养：将产气发酵管培养物转种于伊红美蓝琼脂平板上，36±1℃培...
食品卫生微生物学检验.大肠菌数测定
答：一、大肠菌群的检测GB4789.3-2010 第一法 大肠菌群MPN计数法 第二法 大肠菌群平板计数法 1.1月桂基硫酸盐胰蛋白胨（LST）肉汤:称取35.6g溶于1000ml蒸馏水中，加热煮沸至完全溶解，分装于有倒立发酵管的试管中，每管10ml，121℃高压灭菌15min后备用。双料除蒸馏水外其他成分加倍。1.2煌绿乳...
大肠杆菌检测国家标准
答：法律分析：大肠菌数指数：指每立升中大肠菌群数，采用乳糖发酵法检测。 中国卫生标准是每1000ml饮水中不得超过3个大肠菌群，瓶装汽水和果汁中每100ml大肠菌群不能超过5个。法律依据：《中华人民共和国食品安全法》 第四条 食品生产经营者对其生产经营食品的安全负责。食品生产经营者应当依照法律、法规和...
水中大肠杆菌的测定实验步骤
答：本标准规定了出口食品中大肠菌群、粪大肠菌群和大肠杆菌的检验方法。本标准适用于出口食品的检验。2 设备和材料2.1 吸管:1mL,具0.1mL刻度;5mL和10mL,具1mL刻度。2 2 水浴箱:44.5±0.5℃。2.3 培养箱:36±1℃,44.5±0.5℃。2.4 冰箱:0～5℃和-15～-20℃。2.5 均质器。2.6乳钵和研棒。2.7 平皿:直径...
大肠菌群检测之十倍系列稀释的实验步骤?
答：大肠菌群检测中使用的十倍系列稀释法是一种常见的实验方法，用于确定样品中大肠杆菌的浓度。以下是十倍系列稀释法的实验步骤：1、准备含有大肠杆菌的原始样品，并将其加入到一瓶含有9毫升无菌蒸馏水的试管中。这个浓度可以是高浓度或低浓度。2、将试管中的液体混合均匀。3、取出一毫升（或其他已决定好...
谁知道糕点的大肠菌群怎么测定?
答：食品中大肠菌群数系以100mL(g)检样内大肠菌群最可能数(MPN)表示。1 设备和材料 1.1 温箱：36±1℃。1.2 冰箱:0～4℃。1.3 恒温水浴 :44.5±0.5℃。1.4 天平。1.5 显微镜。1.6 均质器或乳钵。1.7 平皿:直径为90mm。1.8 试管。1.9 吸管。1.10 广口瓶或三角烧瓶:容量为500...
食品中大肠菌群的测定
答：食品中大肠菌群的测定方法：1、MPN法：按照GB 4789.3-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》进行。该方法的结果单位为MPN/g（mL）。2、平板计数法：按照GB 4789.3-2016《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠菌群计数》进行。该方法的结果单位为CFU/g（mL）。大肠菌群的定义...
猪肉大肠菌群的检测方法和过程
答：三步法：乳糖胆盐发酵试验→分离培养→证实试验(乳糖发酵试验)行业标准：两步法：推测试验→证实试验表1大肠菌群在几种常用分离培养上的菌落特征MPN法简介MostProbableNumberMethod最大可能数对样品进行连续系列进行稀释，加入培养基进行培养，从规定的反应呈阳性管数的出现率，用概率论来推算样品中菌数最近...
有关大肠杆菌、金色葡萄糖球菌等有关医疗监测的检测指标和方法啊?
答：在上述这些国家中,每年有金黄色葡萄球菌引起的食物中毒病例,仅次于沙门氏菌,而在细菌性食物中毒病例排到第2~3位,有此而造成的经济损失也相当惨重,在我国由金黄色葡萄球菌引起的食物中毒病例也时有报导,所以目前世界各国都把金黄色葡萄球菌列为食品卫生的法定检测项目。 我国对金黄色葡萄球菌目前采用的方法是以国家...
