PCR的反应包括三个主要步骤 PCR的一次循环包括哪三个步骤以及每个步骤结果?

作者&投稿:党药 (若有异议请与网页底部的电邮联系)

PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成:

1、模板DNA的变性:模板DNA经加热至93℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;

2、模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至55℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;

3、延伸:DNA聚合酶由降温时结合上的引物开始沿着DNA链合成互补链。此阶段的温度依赖于DNA聚合酶。该步骤时间依赖于聚合酶以及需要合成的DNA片段长度。

传统的Taq估计合成1000bp大概需要1分钟、较新的Tbr(来自于嗜热菌Thermus brockianus)约40秒、商业公司生产的融合型聚合酶仅需约10-15秒。有修正功能的则会比较慢。

扩展资料:

实例

优化聚合酶链式反应:

在实践中,聚合酶链式反应可以因各种原因而失败,部分原因是由于其对于污染的敏感性,导致扩增错误的DNA产物。正因为如此,人们已经开发了一些技术和步骤来优化聚合酶链式反应条件。将聚合酶链式反应前的混合物与潜在DNA污染物分开的实验室方案和流程解决了外源DNA的污染问题。

这通常包括从用于分析的区域分理出聚合酶链式反应的设定区域或者说聚合酶链式反应产物的纯化,一次性塑料制品的使用,及对反应装置之间的工作台面彻底清洁。引物的设计技术在改善聚合酶链式反应产物产率和避免杂产物的形成是很重要的。

替代缓冲成分和聚合酶的使用有助于较长或存在其他问题的DNA区域的扩增。在缓冲体系中加入试剂,如甲酰胺,或会增加聚合酶链式反应的特异性和产量。可以利用计算机模拟理论聚合酶链式反应结果(电子聚合酶链式反应),以协助在引物设计。

参考资料:百度百科-聚合酶链式反应



1、变性:目的双链DNA片段在94℃下解链;
2、退火:两种寡核苷酸引物在适当温度(50℃左右)下与模板上的目的序列通过氢键配对;
3、延伸:在TaqDNA聚合酶合成DNA的最适温度下以目的DNA为模板进行合成。

变性,退火,延伸

变性、退火、延伸

1、变性:目的双链DNA片段在94℃或高温下解链为单链;
2、退火:目的基因片片段的5‘,3’端的引物在适当温度(一般为引物Tm值+5℃提高扩增的特异性)下与模板上的目的基因的5‘,3’端给合;
3、延伸:在TaqDNA聚合酶的作用下和引物的引导下将PCR反应体系中的A,G,T,C给合到模板上去,完成DNA片段的复制。产生一条新的DNA片段

PCR原理三个基本步骤常见的PCR技术?~

PCR技术(聚合酶链式反应)由变性--退火(复性)--延伸三个基本反应步骤构成:
①模板DNA的变性:模板DNA经加热至94℃左右一定时间后,使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离,使之成为单链,以便它与引物结合,为下轮反应作准备;
②模板DNA与引物的退火(复性):模板DNA经加热变性成单链后,温度降至40~60℃左右,引物与模板DNA单链的互补序列配对结合;
③引物的延伸:DNA模板--引物结合物在DNA聚合酶的作用下,于72℃左右,以dNTP为反应原料,靶序列为模板,按碱基配对与半保留复制原理,合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链。重复循环变性--退火--延伸三过程,就可获得更多的“半保留复制链”,而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2~4分钟,2~3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。

第一个步骤,变性。变性是通过加热,使DNA氢键断裂,形成单链。
第二步骤,退火。上下游引物结合到变形DNA上下游。
第三步骤,延伸。在引物的引导之下,在DNA聚合酶参与,按照碱基互补配对原则,合成新的DNA单链。

22.简述C/C复合材料石墨化的反应过程的3个阶段
答:(1)铬锰反应阶段:Cr(OH)3 + MnCl2 + 6H2O = Cr2O3 + 2Mn(OH)2 + 6HCl (2)石墨化阶段:MnO2 + C = Mn + CO2 (3)铁锰熔化阶段:Fe + MnO2 = FeO + MnO

三氧化二铬制备
答:氧化还原法: 通过将重铬酸钾(K2Cr2O7)与硫磺混合,进行还原反应,具体步骤包括湿磨、热水洗涤以去除杂质,随后通过压滤、干燥处理,最后粉碎得到纯净的Cr2O3。反应方程式为:K2Cr2O7 + S → K2SO4 + Cr2O3。三氧化铬分解法: 另一途径是利用铬酸酐(4CrO3)在1100℃高温下分解,反应生成Cr2O3和氧气,...

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答:(1)最后一次洗涤的流出液呈无色 (2)水浴加热(并用温度计指示温度) (3)①赶尽体系中的氧气 ②鼓气使反应物进入管式炉中进行反应 (4)①淀粉溶液 由蓝色变成无色,且半分钟内不变色 ②赶尽过量的过氧化钠与水反应得到的氧气,防止其与I - 反应而产生I 2  ③Cr 2 O 7 2- ...

氧化反应和还原反应过程怎么分析写出
答:H2CrO4+2H2O→Cr(OH)3+3OH- 3.根据电荷守恒,在左边加上或减去若干个电子.H2CrO4+2H2O+3e-=Cr(OH)3+3OH-,这就是最终的方程 看氧化反应,H2O2→O2 碱性条件下多H,那麼加OH-,H2O2+2OH-→O2+2H2O.再配平电子,H2O2+2OH--2e-=O2+2H2O ...

配平题,需要分析过程
答:第一步,氧化还原的电荷转移平衡,1 molCr2O7 2-离子生成2 mol Cr3+离子转移6 mol电子 1 molFe2+离子生成1 mol Fe3+离子转移1 mol电子 由此可见,1 molCr2O7 2-离子反应同时需要6 molFe2+ 第二步,物质守恒,1 molCr2O7 2-离子反应会多出7个O,需要14个H才能得到最后的H2O 于是1 ...

工业上利用铬铁矿(FeO?Cr2O3)冶炼铬的工艺流程如下:(l)实验室焙烧铬铁...
答:3次,故答案为:将蒸馏水沿着玻璃棒慢慢倒入漏斗中浸没沉淀,待水流尽后,再重复操作2~3次;(4)两性氢氧化物与强碱反应生成盐和水,所以Cr(OH)3溶于浓氢氧化钠溶液的离子方程式为:Cr(OH)3+OH-=CrO2-+2H2O,故答案为:Cr(OH)3+OH-=CrO2-+2H2O;(5)利用铝热反应冶炼Cr,...

(15分)三氯化铬是化学合成中的常见物质,三氯化铬易升华,在高温下能被...
答:(1)最后一次洗涤的流出液呈无色(3分)(2)水浴加热(并用温度计指示温度)(3分)(3)赶尽体系中的氧气(3分) 鼓气使反应物进入管式炉中进行反应(3分)(4)2Cr 3+ +3Ca(OH) 2 =2Cr(OH) 3 ↓+3Ca 2+ (3分) (1)因为(NH 4 ) 2 Cr 2 O 7 显桔红色,所以...

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答:发生电离:Cr2O3═2Cr3++3O2-,电解Cr2O3的阳极反应式为:2O2--4e-═O2↑,故答案为:2O2--4e-═O2↑ 液态(或熔融态).(3)铬能慢慢溶于稀盐酸、稀硫酸,但不溶于浓硝酸,说明铬被浓硝酸氧化成致密的保护膜.故答案为:表面生成致密氧化膜(或发生钝化).(4)①因KSP(Ag2Cr2O4...

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