做定点突变PCR时,如果模板加多了,会怎么样?
最佳的肯定是阴性的板子一个都没长，也就说明你实验组的板子上长出来的全部是突变成功的，如果消解不完全，就看阴性的平板上菌落多不多(模板是超螺旋质粒，突变的质粒是带缺刻的，转化效率不及超螺旋状态的质粒)，要是相比你实验组板子上菌落数微不足道，那也没关系，挑两个去测序，运气没那么背。
现在你是模板多加了一点，那其实完全可以在后续的步骤中补救；比如你做了25μl体系的突变PCR，那么除去取5-10μl跑个电泳确认突变引物P成功了，剩下的15μl你可以少取点(比如5μl)进行DpnI消解，并且可以增加DpnI酶的用量和反应时间，这些都可以增加完全消解模板的几率。
如果的模板过量的话，到时候检测的结果就会改过的和没改过的同时存在改过后你所要的基因和改过前的模板基因，因为这两种情况在转化时都能长菌，PCR检测也都一样，只是在测序时才能发现有没有改。这样每次都是测序才发现，显然浪费很多宝贵的时间，所以选择合适的浓度很重要。一般20ng 就好了，
才多加了50ng，没问题的，本来这浓度也是一个大致的数，我pcr做的多了，基本都是靠感觉加模板量的。
个人认为影响不大
定点突变的多点突变~
不同于定点突变的是基于PCR的随机突变，通过改变PCR条件提高PCR过程中的随机出错，这种方法适用于未知的蛋白质，作全局性分析，所以有人称为饱和突变（saturation mutagenesis）。不过这种方法由于没有目的性，分析操作相当繁琐，并且不会出现一个位点2个以上碱基突变，因而应用上有局限性。定点突变适用于蛋白结构已有初步了解的基因，比PCR随机突变更有目的性，也更为精确，简单，同时改造基因更加“随心所欲”。由于定点突变技术在蛋白质组学中有这非常广泛的应用前景，相信这个技术在不远的将来还会有更大的改进和发展，也必将为更多人熟悉应用。
点突变容易恢复，只是涉及单个或者单对碱基的替换。但是移码是一个片段，通常碱基缺失或增加非3地倍数，所以是非常难以恢复的。
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求PCR介导定点诱变的优缺点是什么?
答：优点：1.突变体回收率高。一些改进的方案可使回收率达到近100%。2.快速简便。能用双链DNA作模板，不需制备单链模板，因而不需要将目的DNA亚克隆到单链噬菌体载体上。3.高温度的利用，可降低模板DNA形成二级结构的几率。4.所有反应可以在同一试管中进行。缺点：1.PCR扩增DNA时会产生一定程度的碱基错...
如何利用pcr技术进行基因定向突变
答：将要进行定点突变的序列设计在引物上面 通过PCR扩增目的基因，连接T载体测序，确定成功突变后 在进行相关表达载体的构建
PCR-SSCP用于细胞粘附分子基因的多态性测定的主要缺点是什么?_百度...
答：主要缺点是：①测定点突变时，不能排除假阳性，测定特异性必须由DNA测序来证实；②PCR-SSCP的测定操作难于标准化。PCR-SSCP测定的影响因素较多，没有一个适合于各种情况下的通用实验条件，实验室必须根据自己的摸索，得出自己实验室的最适实验条件。因此，PCR-SSCP对实验操作者的经验要求较高，不好掌握，...
DNA突变的DNA突变技术
答：所设计的寡核苷酸引物在所扩增的目的片段一端引入点突变，PCR扩增后获得两条PCR产物，先将两条均含有突变的片段退火形成新的模板，然后由互补的引物引导延伸合成含有突变位点的全长片段。对于单点突变，Stratagene公司的QuikChangeSite—DirectedMutagenesisKit是不错的选择。通过巧妙设计，将质粒定点突变技术变得...
求助做过点突变的亲,质粒中目的片段的点突变引物设计问题
答：所设计的寡核苷酸引物在所扩增的目的片段一端引入点突变，PCR扩增后获得两条PCR产物，先将两条均含有突变的片段退火形成新的模板，然后由互补的引物引导延伸合成含有突变位点的全长片段。对于单点突变，Stratagene公司的QuikChangeSite—DirectedMutagenesisKit是不错的选择。通过巧妙设计，将质粒定点突变技术变得...
pcr的定点突变,对pcr的保真性的要求是什么
答：pcr的定点突变，对pcr的保真性的要求是特异性、准确性具体如下：1、特异性：扩增产物应只包含目标序列，避免在PCR反应中出现非特异性扩增和杂交等问题。2、准确性：扩增产物应与目标序列完全匹配，不能出现错配或者缺失碱基等错误。
什么叫基因定点突变?
答：是指通过聚合酶链式反应（PCR）等方法向目的DNA片段中引入所需变化（通常是表征有利方向的变化），包括碱基的添加、删除、点突变等。定点突变能迅速、高效的提高DNA所表达的目的蛋白的性状及表征。
用质粒为模板扩增目的片段怎么写
答：在做定点突变的第一步中，我们需要对目标质粒进行扩增。根据查询蚂蚁文库显示。1、扩增的是整个质粒，包括质粒载体和目的片段。2、通过PCR扩增，我们可以获得大量的质粒DNA。3、在后续步骤中，我们会引入定点突变，然后将突变的质粒进行转化、筛选和鉴定。
如何利用pcr技术进行基因定向突变
答：将要进行定点突变的序列设计在引物上面 通过PCR扩增目的基因,连接T载体测序,确定成功突变后 在进行相关表达载体的构建
PCR的应用
答：PCR已经被用于分子生物学的方方面面，主要有：1 DNA片段的扩增。可以很快富集大量的目标片段。可以用来进行基因克隆，探针制备等，如RACE ，TAIL-PCR等。2 基因的重组或突变。如定点突变PCR，重组PCR，易错PCR（用于分子进化）。3 测序。
