生物化学实验紫外法测定蛋白质含量中哪些不良操作会对实验结果产生影响 本科期间会做哪些生化实验?急!!!

作者&投稿:潘蚁 (若有异议请与网页底部的电邮联系)
实验二、紫外分光光度法测定蛋白质含量
【实验目的】
1.掌握紫外分光光度法测定蛋白质含量的原理和方法
2.掌握紫外光分光光度计使用
【实验原理】
蛋白质中含有酪氨酸、色氨酸等氨基酸残基,在紫外光280nm波长处有最大吸收峰,故可用280nm的光吸收值(即光密度的大小)来测定蛋白质的含量。
由于核酸在280nm也有光吸收,对蛋白质的测定有干扰作用。但核酸的最大吸收峰在260nm,如同时测定260nm的光吸收,通过计算可以消除其对蛋白质测定的影响,因此溶液中存在核酸时,必须同时测定280nm和260nm的光密度,方向通过计算测得溶液中的蛋白质浓度。
【实验操作】
1、稀释血清(或其他蛋白质溶液),准确吸取0.1mL血清,置于50mL容量瓶中,用蒸馏水稀释至刻度(即500倍)。
2、测定光密度在紫外分光光度计上,将稀释的蛋白质溶液倒入石英比色杯中,用生理盐水做对照,测得280nm和260nm两个波长的光密度。
【计算】
将测得280nm和260nm波长的光密度值按下列经验公式计算蛋白质浓度。
蛋白质浓度(mg/mL)=1.45D280-0.74D260
【附注】
1、不同的蛋白质和核酸的光吸收率不完全是恒定不变,所以可能产生误差。另外核酸中的嘌呤碱,嘧啶碱在波长260nm和280nm都有光吸收作用。所以核酸的含量在20%以下,D280/D260>1.5时,方可以使用上述公式。
2、本法对于微量蛋白质的测定即快又方便,它还适应于用硫酸铵或其他盐类提纯的蛋白质样品(这种蛋白质样品含多种盐类混杂,用其他方法测定比较困难)。
3、如纯系蛋白质样品,可根据该蛋白质在280nm附近标准吸光系数,直接测定该蛋白质的含量。如牛血清白蛋白的EI280(%)为6.3测定时,按下列公式计算。
样品中牛血清白蛋白浓度(mg/mL)=D280/6.3×10
4、为简便起见,对于混合蛋白质溶液,可用D280乘以0.75来代表其中蛋白质的大致含量(mg/mL)。

生物化学实验关于蛋白质检测~

生物化学实验关于蛋白质检测
实际上,凡分子内含有两个氨甲酰基(-CO-NH2)的化合物,不论是直接相连或是通过一个氮或碳原子间接连接;以及具有一CS-NH2,一C(NH)NH2,-CRH-NH2,-CH2NH-CHNH2CH2OH,-CHOH-CH2NH2等基团的化合物均能产生双缩脲反应;甚至过量的铵盐也会干扰反应。所以,双缩脲反应并非为蛋白质所特有。
【实验试剂和器材】
1.试剂
⑴ 10% NaOH溶液。
⑵ 双缩脲试剂:称取硫酸铜(cupric sulfate,CuSO4•5H2O,A.R.或C.P.)1.50 g,酒石酸钾钠(potassium sodium tartrate,NaKC4H4O6•4H2O,A.R.或C.P.)6.0 g,分别用蒸馏水约250 mL溶解后,全部转移于1 L容量瓶中,混合;再加入10% NaOH溶液300 mL,随加随摇匀;最后用蒸馏水稀释至1 L,保存于塑料试剂瓶中。如无红色或黑色沉淀出现,此试剂可长期使用。
⑶ 标准血清:收集足量的新鲜血清(单份的或混合的),每100 mL加入叠氮钠50 mg,置于冰箱内分装后冰冻保存。
⑷ 生理盐水,即0.9%的NaCl溶液。
2.器材
⑴ 试管及试管架。
⑵ 刻度吸量管。
⑶ 722型分光光度计。

蛋白浓度测定——Bradford
DNA提取及定量测定
植物中过氧化物酶活性的测定
抗坏血酸过氧化物酶活性的测定
分光光度计的使用
氨基酸的分离鉴定——纸层析法
蛋白质的透析
考马斯蓝法测定蛋白质含量
应该就这些啦,顺序我记不太清啦!!!

用紫外吸收法测定核酸含量,若样品中含有蛋白质,应如何排除干扰?_百度...
答:核酸对紫外光的最大吸收凤位于260nm处,而蛋白质位于280nm处,260nm的吸收仅为核酸的1/10,因此蛋白质含量较底时对实验影响不大;当样品中蛋白质含量较高时,将样品移至试管中,加入一定量稀盐溶液,用玻璃棒小心搅拌,使蛋白质沉淀,滴加少量25%SDS溶液,边加边轻轻搅拌。加毕,在60℃水浴中保温...

李建武等编,生物化学实验原理和方法,有几个版本
答:蛋白质定性方法茚三酮反应 1.范围本方法采用茚三酮试剂与蛋白质中a-氨基酸反应生成蓝紫色化合物最大吸收值的波长为570nm 本方法适用于各类蛋白质测定范围0.5 g 50 g 蛋白质 2.原理茚三酮是使氨基酸和多肽显色的重要试剂当茚三酮在弱酸性条件下和-氨基酸反应时氨基酸被氧化分解生成醛放出NH3 和C02...

生物化学中茚三酮反应有什么用,具体解释一下为什么可以定量及定性氨基 ...
答:蛋白质定性方法茚三酮反应 1.范围本方法采用茚三酮试剂与蛋白质中a-氨基酸反应生成蓝紫色化合物最大吸收值的波长为570nm 本方法适用于各类蛋白质测定范围0.5 g 50 g 蛋白质 2.原理茚三酮是使氨基酸和多肽显色的重要试剂当茚三酮在弱酸性条件下和-氨基酸反应时氨基酸被氧化分解生成醛放出NH3 和C02...

头发蛋白含量的测定
答:蛋白质含量测定法,是生物化学研究中最常用、最基本的分析方法之一。目前常用的有四种古老的经典方法,即定氮法,双缩尿法(Biuret法)、Folin-酚试剂法(Lowry法)和紫外吸收法。另外还有一种近十年才普遍使用起来的新的测定法,即考马斯亮蓝法(Bradford法)。

测定蛋白质分子量的常用方法
答:紫外分光度检测法及BCA法这五种。在生化实验中,对样品中的蛋白质进行准确可靠的定量分析,是经常进行的一项非常重要的工作。蛋白质是一种十分重要的生物大分子,它的种类很多,结构不均一,分子量又相差很大,功能各异,这样就给建立一个理想而又通用的蛋白质定量分析的方法带来了许多具体的因难。

生物化学实验技术的王林嵩2010年著作图书
答:醋酸纤维素薄膜电泳分离血清蛋白实验四 考马斯亮蓝染色法测定蛋白质含量实验五 紫外吸收法测定蛋白质含量实验六 温度、pH、激活剂和抑制剂对酶活性的影响实验七 DNA的含量测定(二苯胺法)实验八 地衣酚显色法测定RNA含量实验九 DNA的琼脂糖凝胶电泳实验十 肝糖原的提取和鉴定实验十一 3,...

生物化学与分子生物学实验技术【目录】
答:第一节 概述 1. 蛋白质分子的定义及其基本特征2. 蛋白质的分离、纯化和定量方法3. 纯度鉴定的重要性4. 序列分析在理解蛋白质功能中的作用第二节 实验项目 实验一:蛋白质定量测定 Kjeldahl定氮法:测定蛋白质氮含量。 Lowry酚试剂法:蛋白质浓度的快速测定。 紫外光谱吸收法:蛋白质分子结构...

可溶性蛋白质含量的测定
答:检测原理:考马斯亮蓝G-250(Coomassie brilliant blueG-250)测定蛋白质含量属于染料结合法的一种。该染料在游离状态下呈红色,在稀酸溶液中当它与蛋白质的疏水区结合后变为青色,前者最大光吸收在465nm,后者在595nm在一定蛋白质浓度范围内(1-1000μg)),蛋白质与色素结合物在595nm波长下的吸光度与...

蛋白质含量的测定
答:蛋白质含量的测定是生物化学实验中的重要项目之一。蛋白质是生物体内重要的生物大分子,参与了生物体内各种生命活动的调节和执行。因此,准确地测定生物样品中蛋白质的含量对于了解生物样品的质量和功能具有重要意义。目前常用的蛋白质含量测定方法有:凯氏定氮法:通过测定样品中氮原子的含量来推算蛋白质的...

可以发生双缩脲反应生成紫红色物质的是
答:在生物化学领域,双缩脲反应是一种常用的实验方法,用于检测和定量蛋白质和多肽的含量。例如,可以通过双缩脲反应来测定血清中蛋白质的含量,以评估患者的营养状况或疾病进程。此外,在生物学实验中,双缩脲反应也常被用来检测和比较不同生物样品中的蛋白质含量。除了蛋白质和多肽外,一些含有两个或更多...